[发明专利]固定核配体的方法

权利要求书

1.通过移植到具有活化的羧酸基团的固体支持物上，固定包含至少一个伯胺官能团的核配体的方法，所述方法包括在小于6的pH在所述固体支持物上共价偶联所述核酸的步骤。

2.在固体支持物上固定包含至少一个伯胺官能团的核配体的方法，所述方法包括下列步骤：

a)提供固体支持物，所述固体支持物在其表面包含活化的羧酸基团，

b)提供核配体，所述核配体包含至少一个伯胺官能团，和

c)在pH小于6的条件下，进行所述核酸与存在于所述固体支持物的表面的活化的羧酸基团的偶联，

应理解步骤a)和b)的顺序没有区别。

3.如权利要求1和2的任一项中要求保护的方法，所述方法特征在于活化的羧酸基团是通过与N-羟基琥珀酰亚胺或其衍生物反应获得的。

4.如权利要求1至3的任一项中要求保护的方法，所述方法特征在于偶联步骤的pH包括在从3.5至4.5的范围内。

5.如权利要求1至4的任一项中要求保护的方法，所述方法特征在于偶联步骤是在从0℃至35℃的温度范围进行的。

6.如权利要求1至5的任一项中要求保护的方法，所述方法特征在于核配体是5至120个核苷酸的多核苷酸，所述多核苷酸在其3’或5’端包含至少一个伯胺官能团。

7.如权利要求1至5的任一项中要求保护的方法，所述方法特征在于核配体包含(i)5至120个核苷酸长的多核苷酸和(ii)与所述多核苷酸结合的间隔子链，伯胺官能团附着于所述多核苷酸的3’或5’端或附着于间隔子链。

8.如权利要求7中要求保护的方法，所述方法特征在于间隔子链选自用伯胺官能团取代的C2-C20线性烷基和C2-C20聚乙二醇的组。

9.如权利要求1至8的任一项中要求保护的方法，所述方法特征在于固体支持物选自由硅胶、葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶，及其衍生物构成的组。

10.如权利要求2至9的任一项中要求保护的方法，所述方法特征在于偶联步骤c)包括下列两个步骤：

c1)在pH小于6的条件下，反应所述核配体与存在于所述固体支持物的表面的活化的羧酸基团，和

c2)在pH大于7.5的条件下，继续偶联所述核配体与存在于所述固体支持物的表面的活化的羧酸基团的反应。

11.如权利要求1至10的任一项中要求保护的方法，所述方法特征在于偶联步骤随后为阻断偶联反应的步骤d)。

12.如权利要求1至10的任一项中要求保护的方法，所述方法特征在于包含至少一个伯胺官能团的核配体由核适配体组成。

13.用于制备亲和支持物的方法，所述方法包括实施如权利要求1至12的任一项中定义的固定方法。

14.通过如权利要求13中定义的制备方法获得的固体亲和支持物。

15.固体亲和支持物，在所述固体亲和支持物上通过酰胺键固定核配体并且在所述固体亲和支持物中用核配体衍生化至少0.01％的初始存在于其表面的羧基官能团。

16.固体亲和支持物，在所述固体亲和支持物上通过酰胺键固定核配体，所述亲和支持物是具有至少0.005μmol/ml至0.4μmol/ml凝胶的核配体密度的层析凝胶。

17.如权利要求16中要求保护的固体亲和支持物，所述固体亲和支持物特征在于固体亲和支持物选自由琼脂糖凝胶、葡聚糖凝胶、硅胶，及其衍生物构成的组。

18.如权利要求14至17的任一项中要求保护的固体亲和支持物，所述固体亲和支持物特征在于核配体是核适配体且所述固体支持物在其表面具有式(III)的下列结构

其中：

-SUP代表支持物，

-NH-(SPAC)n-NUCL代表核适配体，其中：

■n是等于0或1的指数，

■SPAC代表间隔子链，和

■NUCL代表特异性结合靶分子的核酸，所述核酸包含从5至120个核苷酸。

19.从核配体和靶分子的相互作用获得的复合物，所述复合物是在如权利要求14至18的任一项中定义的固体支持物的表面形成的。