[发明专利]一种快速准确检测番茄黄化曲叶病毒的方法

说明书

技术领域    

本发明涉及基因工程中病毒检测技术领域，特别涉及一种快速准确检测番茄黄化曲叶病毒的方法。

背景技术   

番茄是我国主要的蔬菜品种之一，在全国各蔬菜产区均有大面积的种植，而且在蔬菜周年供应中占有非常重要的地位。随着温室大棚蔬菜种植技术的推广以及蔬菜反季节栽培经济效益的提高，温室番茄栽培面积连年增长。与此同时，其病害的发生也呈现逐步加重的趋势：番茄花叶病毒病(Tomato mosaic virus，TMV)和黄瓜花叶病毒病(Cucumber mosaic virus，CMV)一直是番茄生产中的主要病毒病，但近年来，在番茄主产区相继发现了一种新的病毒病--番茄黄化曲叶病毒病。

番茄黄化曲叶病毒(Tomato Yellow Leaf Curl Virus,TYLCV)属于双生病毒科(Geminiviridae)菜豆金色花叶病毒属(Begomovirus)，主要通过烟粉虱(Bemisia tabaci) 传播, 可以侵染茄科、豆科等多种植物，是分布广泛的世界性番茄病毒之一。由TYLCV引起的番茄黄化曲叶病毒病是一种毁灭性病害，自1964年发现以来，已给许多国家和地区造成了严重危害。低密度烟粉虱就可以导致病毒扩散与流行，且可以终生传毒。番茄在开花前感染黄化曲叶病毒病造成的减产幅度很大，一般减产在80%以上，严重的甚至绝收，坐果后染病会有一定的产量，但果实品质很差。番茄植株感染病毒后，初期主要表现为生长点叶片叶缘先变黄色，后整个叶片黄化，生长迟缓甚至停滞生长，茎节间明显变短，植株矮化现象明显，叶片变小变厚、有褶皱、叶缘向上卷曲，叶质脆硬，这些症状主要表现在植株上部叶片上，下部老叶症状不明显；如果在苗期染病则植株严重矮化，无法正常开花结果；在生长发育后期染病植株仅上部叶片和新芽表现症状，但坐果数量明显减少，果实膨大速度慢、果实小，成熟期果实着色不均匀是该病在果实上的表现症状，果实产量和商品价值均大幅度下降，经济效益受到严重损失。此病一旦发生，除了砍掉染病的植株，尚未寻找到有效诊治和防止病害扩散的方法，而且将会给当地的番茄生产带来巨大的损失，因此能否有效及时地诊断番茄病害已成为制约番茄高产的关键因素。

番茄黄化曲叶病毒病在全世界广泛分布，目前至少有39个国家的棉花、木薯和番茄等作物正在遭受此病毒的毁灭性危害，因而成为各国学者的研究热点。近年来，番茄黄化曲叶病毒病在我国的上海、广西、陕西、云南、江苏、浙江、重庆、广东等地广泛发生，并对上述地区的番茄生产构成了严重威胁，而且有向北方扩展的可能性和趋势。2007年10月河南开封市开封县1000多亩温室番茄普遍发生病毒病，症状和番茄黄化曲叶病毒病相同，毁种面积大约占五分之一，勉强没有毁种的大棚预计减产都在30%；2007年11月山东济宁报告温室番茄发生疑似的番茄黄化曲叶病毒病，另外，自2005年以来在山东潍坊、菏泽及寿光等部分地区也发现类似的病毒病症状。可见对于保护地番茄种植地区来说，建立长期有效的番茄病毒检测体系，完善检测技术已是迫在眉睫，要严防该病发生，如若控制不当，将造成灾难性的后果。

TYLCV的早期诊断主要依赖于感病作物的症状，但症状往往随着土壤、生长条件和气候的变化而出现差异；加之基层农技人员对该番茄病害的症状了解得不够清楚，易于与其他番茄病害产生混淆，从而误诊误治，延误病情，甚至造成病害的大面积传播。因此，寻找一种大众型、经济型、实用型、快捷型的检测方法显得尤为重要。

目前，植物病毒检测的主要方法是以PCR为基础的分子生物学检测法和以ELISA为代表的免疫学检测法。虽然PCR法是业界公认的准确性比较高的检测方法，但该法专业性强、技术含量高，检测试剂昂贵，而且还需要PCR仪等贵重仪器，造成检测成本居高不下，因此，只能局限在实验室内进行专业检测，难以作为一种常规检测技术进行推广应用。