[发明专利]西门塔尔牛蜘蛛腿综合征致病位点PCR-RFLP检测方法

权利要求书

1.一种西门塔尔牛蜘蛛腿综合征致病位点PCR-RFLP检测用引物，其核苷酸序列如下：

5’-ATGAAGGGACAGAGTGGTCGT-3’，

5’-CGTGGGTCAGTTGGTCAGAGT-3’。

2.含权利要求1所述引物的检测试剂盒。

3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，其还包括：DNA裂解液、阴性模板和/或阳性模板。

4.一种检测西门塔尔牛蜘蛛腿综合征致病位点的方法，其特征在于，所用引物为权利要求1所述引物，或所用试剂盒为权利要求2或3所述的试剂盒，其具体包括以下步骤：

1)目的基因的扩增

以西门塔尔牛组织细胞DNA为模板，进行PCR反应，回收PCR扩增产物；

2)核酸内切酶酶切PCR扩增产物；

3)酶切产物的RFLP分型。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增条件为95℃预变性5min，然后95℃变性30s、60℃退火30s、72℃延伸30s，共35个循环，72℃最终延伸10min。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述引物用量为1.5μL，引物的终浓度为10μM。

7.如权利要求4～6任意一项所述的方法，其特征在于，所述核酸内切酶为DraIII。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，DraIII内切酶采用15μL的酶切体系，各组分体系如下：PCR产物，8μL；NEB buffer3，1.5μL；100×BSA，0.15μL；内切酶，0.35μL；ddH₂O，5μL。

9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，酶切反应条件为37℃下孵育13小时。

10.权利要求4～9任意一项所述方法在牛抗病育种中的应用。