[发明专利]一种菊芋碳源培养彩绒革盖菌诱导草酸脱羧酶的方法有效
| 申请号： | 201210002911.9 | 申请日： | 2012-01-06 |
| 公开（公告）号： | CN102533707A | 公开（公告）日： | 2012-07-04 |
| 发明（设计）人： | 洪枫;宫搏阳;杨雪霞 | 申请（专利权）人： | 东华大学 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88;C12R1/645 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所 31233 | 代理人： | 黄志达;谢文凯 |
| 地址： | 201620 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 菊芋 碳源 培养 彩绒革盖菌 诱导 草酸 脱羧酶 方法 | ||
1.一种菊芋碳源培养彩绒革盖菌诱导草酸脱羧酶的方法，包括：
(1)将菊芋在105℃汽蒸15-30min，然后按照1∶1-1∶10的质量比加水，匀浆得到菊芋浆；在30-120℃下浸提0.5-3h，过滤，离心，得到菊芋汁；
(2)将上述菊芋汁稀释至7-100g/L的总糖量，补加氮源和无机盐获得发酵培养基，调节pH值至4.0-5.0，灭菌后备用；
(3)以3-15vol％的接种量将彩绒革盖菌的菌丝体种子液接入发酵培养基，在10-30℃和100-250rpm条件下培养2-6天；
(4)待菌丝球形成时，加入终浓度为1-100mM的草酸诱导产生草酸脱羧酶，培养0.5-6天后获取菌丝体；
(5)将上述菌丝体经破碎或冷冻后破碎，然后用0.2M、pH 3.7的醋酸缓冲液提取菌丝碎片，去除残渣，即得草酸脱羧酶粗酶液。
2.根据权利要求1所述的一种菊芋碳源培养彩绒革盖菌诱导草酸脱羧酶的方法，其特征在于：所述步骤(2)中的发酵培养基中组分为：总糖为7-100g的菊芋汁，3.0g蛋白胨，1.0g KH2PO4，0.2g Na2HPO4·12H2O，0.5g MgSO4·7H2O以及微量元素1ml，以水定容至1L。
3.根据权利要求1所述的一种菊芋碳源培养彩绒革盖菌诱导草酸脱羧酶的方法，其特征在于：所述步骤(3)中的菌丝体种子液的培养基组分为：7-50g葡萄糖，3.0g蛋白胨，1.0g KH2PO4，0.2g Na2HPO4·12H2O，0.5g MgSO4·7H2O以及微量元素1ml，以水定容至1L，。
4.根据权利要求2或3所述的一种菊芋碳源培养彩绒革盖菌诱导草酸脱羧酶的方法，其特征在于：所述微量元素的组分为：FeSO4·7H2O 10g，MnSO4·H2O 1.0g，ZnSO4·7H2O 1.0g，CuSO4·5H2O 2.0g，CaCl2·2H2O 13g，用水定容至1L。
5.根据权利要求1所述的一种菊芋碳源培养彩绒革盖菌诱导草酸脱羧酶的方法，其特征在于：所述步骤(4)中的草酸加入方式为间歇式、分批补料式或连续式。
6.根据权利要求1所述的一种菊芋碳源培养彩绒革盖菌诱导草酸脱羧酶的方法，其特征在于：所述步骤(5)中的破碎方式为研磨破碎、珠磨破碎、均质机破碎或超声破碎。
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