[发明专利]人白细胞介素-10的高效表达方法

权利要求书

1.用于在酵母中表达外源蛋白的方法，其包括下述步骤：

1)构建表达载体，所述表达载体包含rDNA非编码区，抗生素抗性基因，分泌信号肽和外源蛋白的编码序列；

2)逐步增加抗生素的浓度，从而扩增所述表达载体的拷贝数，构建含有不同拷贝数的克隆的库；

3)选择表达克隆，表达并回收外源蛋白。

2.权利要求1所述的方法，其中所述rDNA非编码区在酵母基因组中具有多拷贝特性，分散在酵母的4条染色体上。

3.权利要求1或2所述的方法，其中所述rDNA非编码区序列为SEQ ID No：1。

4.权利要求1-3中任一项所述的方法，其进一步包括低温下甲醇诱导外源蛋白分泌表达。

5.权利要求1-4中任一项所述的方法，其还包括比较酵母胞内外源蛋白的量与分泌到上清中的外源蛋白的量的相对比例关系，从而选择表达克隆，表达并回收外源蛋白。

6.权利要求1-5中任意一项所述的方法，其中所述外源蛋白的编码序列是未经密码子优化的序列或者是经密码子优化的序列，优选地所述外源蛋白是人白细胞介素-10。

7.权利要求1-6中任意一项所述的方法，其中所述分泌信号肽包括α-因子、α-淀粉酶、葡糖淀粉酶、血清白蛋白分泌信号肽。

8.权利要求1-7中任意一项所述的方法中构建的表达载体。

9.包含权利要求8所述的表达载体的酵母菌株。

10.权利要求8所述的表达载体和权利要求9所述的酵母菌株用于表达人白细胞介素-10的用途。