[发明专利]一种淀粉基质专用水稻的转基因培育方法

权利要求书

1.一种淀粉基质专用水稻的转基因培育方法，包括以下步骤：

1）取直链淀粉含量介于10%~15%的水稻品种的成熟胚为外植体，接种至诱导培养基，在25±1℃、光强3000勒克司光条件下诱导形成愈伤组织；

 2）将诱导形成2周的愈伤组织，转移至继代培养基，继代培养至愈伤组织进入成倍增殖期；

 3）将成倍增殖的愈伤组织，在25±1℃、避光的黑暗条件下进行受体愈伤组织的预培养2天；

4）将经过预培养的愈伤组织，在农杆菌悬浮液中浸泡10分钟，之后弃去菌液，用无菌滤纸吸干，接种于共培养基上，在25±1℃、避光的黑暗条件下共培养2天；

5）将上述共培养愈伤组织，洗净、晾干后，转移到筛选培养基，在25±1℃、避光的黑暗条件下培养6周，收集新长出的抗性愈伤组织，转移至新的筛选培养基上，再进行连续2轮继代筛选，每隔3周转继１次；

6）取3轮筛选后的抗性愈伤组织，转移至分化培养基，在25±1℃、光强3000勒克司光条件下诱导分化成苗，对抗性植株进行组织化学染色和分子检测，选留含目的基因插入序列的转基因植株，所说的目的基因插入序列是指包括目的基因淀粉分支酶基因sbeIIb、标记基因葡糖苷酸酶基因GUS和筛选基因抗潮霉素基因HPT的插入序列，目的基因淀粉分支酶基因sbeIIb片段长643bp；

7）取入选的转基因植株，田间种植后收获种子，鉴定淀粉凝胶性能，选留淀粉糊化冷却后可形成半固态凝胶的转基因植株；

8）继续种植步骤7）筛选的转基因株系，评价的淀粉凝抗性表达稳定性，对淀粉凝抗性稳定的优良株系进行种子繁殖，为培育的淀粉基质专用水稻。

2.根据权利要求1所述的高抗性淀粉含量水稻的培育方法，其特征在于所说的诱导培养基为N6基本培养基添加2,4-D1.5mg、蔗糖30g和琼脂粉6.8g，pH灭菌前5.8。

3.根据权利要求1所述的高抗性淀粉含量水稻的培育方法，其特征在于所说的继代培养基为N6基本培养基添加2,4-D 1mg蔗糖30g和琼脂粉6.8g，pH灭菌前5.8。

4.根据权利要求1所述的高抗性淀粉含量水稻的培育方法，其特征在于所说的共培养基为N6基本培养基添加2,4-D 0.5mg、乙酰丁香酮1mg、蔗糖30g、和琼脂粉6.8g，pH灭菌前5.8。

5.根据权利要求1所述的高抗性淀粉含量水稻的培育方法，其特征在于所说的筛选培养基为N6基本培养基添加2,4-D 0.5mg、潮霉素30mg、羧卞300 mg、蔗糖30g和琼脂粉6.8g，pH灭菌前5.8。

6.根据权利要求1所述的高抗性淀粉含量水稻的培育方法，其特征在于所说的分化培养基为N6基本培养基添加6-BA1mg、NAA0.5mg、KT0.5mg、羧卞200mg、蔗糖30g和琼脂粉6.8g，pH灭菌前5.8。

7.根据权利要求2-6所述的高抗性淀粉含量水稻的培育方法，其特征在于所说的N6基本培养基为KNO₃ 2830mg、(NH₄)₂SO₄ 463mg、CaCl₂·2H₂O 166mg、MgSO₄·7H₂O 185mg、KH₂P0₄ 400mg、MnSO₄·4H₂O 4.4mg、ZnSO₄·7H₂O 1.5mg、FeSO₄·7H₂O 27.8mg、Na₂-EDTA·2H2O 37.3mg、H₃BO₃ 1.6mg、肌醇100mg、烟酸0.5mg、维生素B6 0.5mg、维生素B1 0.5mg和甘氨酸2mg。