[发明专利]一种检测利玛原甲藻的方法有效
| 申请号： | 201210005132.4 | 申请日： | 2012-01-09 |
| 公开（公告）号： | CN102433390A | 公开（公告）日： | 2012-05-02 |
| 发明（设计）人： | 唐晨;董丽;何培民;饶涛;贾睿 | 申请（专利权）人： | 上海海洋大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/06;G01N21/64 |
| 代理公司： | 上海伯瑞杰知识产权代理有限公司 31227 | 代理人： | 吴瑾瑜 |
| 地址： | 201306 上海*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 利玛 原甲藻 方法 | ||
1.一种检测利玛原甲藻的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)用CTAB改良法提取待测水样中的玛原甲藻的基因组DNA；
(2)用特异性引物和特异性探针，扩增利玛原甲藻的ITS和PKS序列中的至少一种，采用荧光定量PCR检测方法，对照标准曲线，确定待测水样中玛原甲藻含量；
ITS基因序列的特异性引物为：上游cttggaatggcgcaacaagc，下游aaaccacaagacacgatgaaacg；
PKS基因序列的特异性引物为：上游atccccagcaacgattattaatgg，下游tgcgtgaaagcgaagagtcc；
ITS基因序列的TaqMan探针包括以下核苷酸序列：
ccaaacctgccaccgttcctcgct；
PKS基因序列的TaqMan探针包括以下核苷酸序列：
cggctcgctccaacgcttcccaac。
2.权利要求1所述检测利玛原甲藻的方法，其特征在于，步骤(2)中94～96℃条件下，预变性1.5～2.5min；循环温度，94.5～95.5℃10sec、59.8～60.5℃30sec，35～40次循环。
3.权利要求1所述检测利玛原甲藻的方法，其特征在于，步骤(2)中PKS基因序列的TaqMan探针5’端使用报告染料FAM标记；ITS基因序列的TaqMan探针5’端使用报告染料HEX标记；PKS基因序列和ITS基因序列的TaqMan探针3’端用报告染料TAMRA标记。
4.权利要求1所述检测利玛原甲藻的方法，其特征在于，步骤(2)中标准曲线的测定构建方法包括以下步骤：
以对应不同浓度利玛原甲藻的利玛原甲藻基因组DNA为模板，分别加入相应的基因序列的特异性引物和TaqMan探针扩增。
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