[发明专利]转Bt基因棉花标准质粒及其应用有效
| 申请号： | 201210008324.0 | 申请日： | 2012-01-12 |
| 公开（公告）号： | CN102586302A | 公开（公告）日： | 2012-07-18 |
| 发明（设计）人： | 付贤树;叶子弘;俞晓平;崔海峰;金荣愉;赵煦泓 | 申请（专利权）人： | 中国计量学院 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 杭州天正专利事务所有限公司 33201 | 代理人： | 黄美娟;冷红梅 |
| 地址： | 310018 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | bt 基因 棉花 标准 质粒 及其 应用 | ||
1.一种转Bt基因棉花标准质粒，由SEQ ID No.1所示核苷酸片段与SEQ ID No.2所示核苷酸片段经过拼接后，插入克隆载体制得。
2.如权利要求1所述的转Bt基因棉花标准质粒，由SEQ ID No.3所示核苷酸片段插入pEASY-T3载体制得。
3.如权利要求1所述的转Bt基因棉花标准质粒在检测转Bt基因农作物的转基因含量中的应用。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述转Bt基因棉花标准质粒用于检测下列之一的Bt外源基因：(1)CryIA(a)，(2)CryIA(b)，(3)CryIA(c)，(4)CryIab/ac。
5.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述的农作物为下列之一：水稻、玉米、大豆、棉花、油菜。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述的农作物为棉花。
7.一种转Bt基因棉花的荧光定量PCR检测试剂盒，主要包括特异性引物和探针、PCR缓冲液、脱氧三磷酸核苷混合物和DNA聚合酶和转Bt基因棉花标准质粒，其特征在于：所述特异性引物和探针序列如下：
Bt-F-Primer：5’-GTAAGGTCGTTGTAACGGCTATTG-3’
Bt-R-Primer：5’-CGCCTTGACCACAGCTATCC-3’
Bt-Probe：5’-FAM-CCACCTTTGCCCAAACACGCTAACG-Eclipse-3’
其中FAM为荧光报告基团，Eclipse为荧光淬灭基团；
ACP-F-Primer：5’-CAAACAAGAGACCGTGGATAAGGTA-3’
ACP-R-Primer：5’-CAAGAGAATCAGCTCCAAGATCAAG-3’
ACP-Probe：5’-FAM-TTAGCTTTAGACAATGACAAACCAATCACCGG-TAMRA-3’
其中FAM为荧光报告基团，TAMRA为荧光淬灭基团；
所述转Bt基因棉花标准质粒由SEQ ID No.3所示核苷酸片段插入pEASY-T3载体制得。
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