[发明专利]一种NPTⅡ基因检测用引物组、相应的试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种NPTII基因检测用引物组，其特征在于，所述引物组以NPTII基因为靶基因、基于环介导等温扩增技术设计，所述引物组由外引物F3、外引物B3、内引物FIP和内引物BIP组成，各引物的核苷酸序列分别为：

外引物F3(1)：

GCTGGATCGTTTCGCATGA

外引物B3(1)：

GCAGTTCATTCAGGGCACC

内引物FIP(1)：

GCCCAGTCATAGCCGAATAGCCTTTTGAACAAGATGGATTGCACGC

内引物BIP(1)：

GACAATCGGCTGCTCTGATGCCTTTTGGACAGGTCGGTCTTGACA

或

外引物F3(2)：

CTGTTCGCCAGGCTCAAG

外引物B3(2)：

CGCCAAGCTCTTCAGCAATA

内引物FIP(2)：

GAAAAGCGGCCATTTTCCACCATTTTGCGAGGATCTCGTCGTGA

内引物BIP(2)：

GGATTCATCGACTGTGGCCGGTTTTGGTAGCCAACGCTATGTCC。

2.一种检测NPTII基因的试剂盒，其特征在于，所述检测NPTII基因的试剂盒包括以NPTII基因为靶基因、基于环介导等温扩增技术设计的两对引物：内引物FIP/BIP和外引物F3/B3。

3.如权利要求2所述的检测NPTII基因的试剂盒，其特征在于，所述的两对引物的核苷酸序列分别为：

外引物F3(1)：

GCTGGATCGTTTCGCATGA

外引物B3(1)：

GCAGTTCATTCAGGGCACC

内引物FIP(1)：

GCCCAGTCATAGCCGAATAGCCTTTTGAACAAGATGGATTGCACGC

内引物BIP(1)：

GACAATCGGCTGCTCTGATGCCTTTTGGACAGGTCGGTCTTGACA

或

外引物F3(2)：

CTGTTCGCCAGGCTCAAG

外引物B3(2)：

CGCCAAGCTCTTCAGCAATA

内引物FIP(2)：

GAAAAGCGGCCATTTTCCACCATTTTGCGAGGATCTCGTCGTGA

内引物BIP(2)：

GGATTCATCGACTGTGGCCGGTTTTGGTAGCCAACGCTATGTCC。

4.如权利要求2所述的检测NPTII基因的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括BstDNA聚合酶、反应液、稳定液、显色液和阳性对照液。

5.如权利要求4所述的检测NPTII基因的试剂盒，其特征在于，

所述的反应液为：每1L反应液含有1.6～2mmol dNTP、20～25mmol Tris-Cl、10～12.5mmol氯化钾、10～12.5mmol硫酸铵、8～10mmol硫酸镁、1～1.25mlTritonX-100、0.8～1mol甜菜碱、内引物FIP/BIP各1.6～2mol和外引物F3/B3各0.2～0.25mol；

所述的稳定液为石蜡油；

所述的显色液为SYBR Green I或Eva Green；

所述的阳性对照为NPTII基因DNA片段。

6.如权利要求5所述的检测NPTII基因的试剂盒，其特征在于，所述的反应液为：每1L反应液中含有2mmol dNTP、25mmol Tris-Cl、12.5mmol氯化钾、12.5mmol硫酸铵、10mmol硫酸镁、1.25ml TritonX-100、1mol甜菜碱、内引物FIP/BIP各2mol和外引物F3/B3各0.25mol。

7.如权利要求4、5或6所述的检测NPTII基因的试剂盒，其特征在于，所述检测NPTII基因的试剂盒还包括反应管，所述的反应管由管体和管盖两部分组成，管体内腔的下部设有将其分隔成A、B两个空腔的纵向延伸的隔板。