[发明专利]一种NPTⅡ基因检测用引物组、相应的试剂盒及其使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测试剂，具体涉及一种NPTII基因检测用引物组、相应的试剂盒及其使用方法。 

背景技术

NPTII基因作为新霉素磷酸转移酶基因，广泛应用于转基因玉米、油菜等转基因农作物。 

为了加强对转基因产品的监督和管理，目前发展了多种转基因成分检测方法，从基于蛋白质的ELISA检测技术到基于核酸的聚合酶链式反应(PCR)技术以及快速发展的基因芯片技术。其中，PCR检测技术以其灵敏性、特异性、高效性而最为通用，这种技术通过检测基因产品中含有的外源核酸片段来鉴定，随着荧光实时定量聚合酶链式放映(real time PCR)的出现，不仅能够进行转基因产品的定性鉴定，而且可以对转基因成分进行定量。 

以PCR技术为代表的转基因产品检测技术在实际应用中也存在一些问题，如普通PCR技术需要专门的仪器，而且存在容易交叉污染和操作繁琐的缺点。而Real time PCR技术虽然较好地解决了交叉污染的问题，并简化了操作过程，但却需要更复杂的定量测定仪器，因此不适用于现场快速检测。而且，实时定量聚合酶链式反应PCR技术中，荧光探针的成本较高，加大了推广应用的难度。基因芯片技术能够实现快速和高通量的检测，然而价格昂贵，检测成本高。所以即使运用生物技术发展的最新成果对满足转基因产品检测要求的不断条具有重要意义。其中，等温扩增(Isothermal Amplification)核酸快速检测技术是转基因产品检测技术上的长足进步，现已建立起来的环介导等温扩增技术 (loop-mediated isothermal amplication of DNA，简称LAMP)，具有很多的优越性，且目前也未见有用环介导等温扩增技术检测转基因作物NPTII基因快速检测试剂盒。 

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术的不足之处而提供一种可用于环介导等温扩增技术检测NPTII基因，且对所述NPTII基因具有较高特异性的检测用引物组。 

本发明的另一个目的在于提供一种检测成本低、检测速度快、使用方便，特异性高的基于环介导等温扩增技术的检测NPTII基因的试剂盒；同时，本发明还提供一种所述试剂盒的使用方法。 

本发明的目的可以通过以下技术措施实现：一种NPTII基因检测用引物组所述引物组以NPTII基因为靶基因、基于环介导等温扩增技术设计，所述引物组由外引物F3、外引物B3、内引物FIP和内引物BIP组成，各引物的核苷酸序列分别为： 

外引物F3(1)： 

GCTGGATCGTTTCGCATGA 

外引物B3(1)： 

GCAGTTCATTCAGGGCACC 

内引物FIP(1)： 

GCCCAGTCATAGCCGAATAGCCTTTTGAACAAGATGGATTGCACGC 

内引物BIP(1)： 

GACAATCGGCTGCTCTGATGCCTTTTGGACAGGTCGGTCTTGACA 

或 

外引物F3(2)： 

CTGTTCGCCAGGCTCAAG 

外引物B3(2)： 

CGCCAAGCTCTTCAGCAATA 

内引物FIP(2)： 

GAAAAGCGGCCATTTTCCACCATTTTGCGAGGATCTCGTCGTGA 

内引物BIP(2)： 

GGATTCATCGACTGTGGCCGGTTTTGGTAGCCAACGCTATGTCC。 

本发明的NPTII基因检测用引物组，是基于环介导等温扩增技术，根据已公开的转基因农作物及其加工产品中NPTII基因序列，选取转基因农作物及其加工产品中NPTII基因的特异性序列，然后分析设计出的，能专一性鉴别转基因农作物及其加工产品中NPTII基因的特异性引物组，通过LAMP来鉴定转基因农作物及其加工产品中的NPTII基因。 

本发明还提供一种检测NPTII基因的试剂盒，所述检测NPTII基因的试剂盒包括以NPTII基因为靶基因、基于环介导等温扩增技术设计的两对引物：内引物FIP/BIP和外引物F3/B3。 

作为本发明所述检测NPTII基因的试剂盒的优选实施方式，所述的两对引物的核苷酸序列分别为： 

外引物F3(1)： 

GCTGGATCGTTTCGCATGA 

外引物B3(1)：