[发明专利]厚叶岩白菜组培苗低温保存方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养领域，具体涉及一种厚叶岩白菜组培苗低温保存方法。

背景技术

厚叶岩白菜[Bergenia crassifolia(L.)Fritsch.]属虎耳草科岩白菜属的一种多年生草本植物，生于海拔2500-3600m的湿润的峭壁石崖缝隙中，在我国主要分布于陕西、新疆、四川、云南及西藏。它是良好的丛生地被植物，叶大而厚，花期5-6个月，花大而色艳，可谓花叶俱美，观赏性及适应性强，是一种较好的观叶、观花用高山野生花卉，可以作为城市绿化中极早春开花的地被植物使用。

厚叶岩白菜又为民间常用药，最早载于清《分类草药性》，具有滋补虚损，止血、化痰、清热等多种功效，中医和临床广泛用于治疗咳嗽、吐血、便血、肠炎、白带、肿毒等，外用治疗疮毒、疥癣，是一种宝贵的药材，其有效成分岩白菜素被广泛研究，已经作为一种中药制剂被广泛应用于临床。近年来的临床实验表明，其在治疗风湿性关节炎、慢性气管炎方面有一定的疗效，还能增强免疫功能。最近有学者报道岩白菜提取物具有抗菌和抗氧化的作用。

岩白菜作为临床用草药之一，历史悠久，但是随着对其中化学成分和生物活性物质的不断深入研究，使得在临床上的应用越来越广，野生资源的有限性与制药需求的不断攀升之间的供需矛盾日益凸显，为了兼顾植物多样性保护与药用资源的合理开发，未来的出路不能继续单纯依赖野生资源，而对厚叶岩白菜进行低温保存不失为一种保存和抢救其日益枯竭的种质资源的好办法。

作物种质资源保存是作物育种的物质基础。未来的农业生产在很大程度上取决于对种质资源的占有和利用程度。据估计，现有植物种以平均每天一种的速度消失，物种一旦灭绝，就不可复得，人类将永远失去利用它的价值。植物种质资源的收集和保存工作，早已受到世界各国包括联合国粮农组织在内的国际植物遗传资源委员会的重视。传统保存方法有种子保存和种植保存。种子保存虽用空间小，并能保存多年，但是在贮藏过程中种子生活力会随时间的延长而下降，且常常受到病虫的危害。再则，一般种子是杂合体，繁殖中性状会分离且不稳定。种植保存成本较高，还可能会受到天灾的危害。而对植物种质低温保存基本上可在保证有较高的存活率、较低的遗传变异的前提下保存植物种质资源。

发明内容

本发明的目的是提供一种厚叶岩白菜组培苗低温保存的方法，以保存其日益枯竭的种质资源。该方法由厚叶岩白菜的外植体诱导出芽、继代两次培养、低温保存以及缓苗继代出新芽四个步骤完成。该方法简单易于操作，植物材料复苏快，生活力高，对于一般组培车间保存原种材料极为实用，能解决快繁生产急用。

本发明所述的一种厚叶岩白菜组培苗低温保存方法，按下列步骤进行：

a、将厚叶岩白菜新鲜叶片用0.5-1g/L洗洁精或洗衣粉水溶液仔细擦洗表面，再用自来水流动冲洗10min，然后将叶片在超净工作台上用浓度为75％酒精表面消毒30s，将0.1％升汞中加入吐温-802-3滴灭菌5-12min，再用含有0.2％的Na₂S₂O₃无菌水冲洗3-5次；

b、将步骤a消毒后的厚叶岩白菜叶片切成0.8-1.2cm²的小块作为外植体，接种于固体培养基上进行愈伤诱导；

c、将步骤b中形成的愈伤组织，转入增殖固体培养基B5+1.0mg/LNAA+1.0mg/L IBA+0.05mg/L 6-BA诱导出芽，继代两次；

d、将步骤c中诱导出芽的厚叶岩白菜无菌苗移入冷藏固体培养基B5+0.1mg/L NAA+0.5mg/L 6-BA+0.01mg/L IBA+25-45g/L葡萄糖+10-40mg/L甘露醇+5.5g/L琼脂中；

e、将步骤d中长势强壮的单苗，移入50毫升冷藏固体培养基底部，放置海尔SC-279GA透明门立式冷藏柜进行低温冷藏，由冷藏柜里的照明灯，每天16小时照射，8-12个月后，在温度20℃下进行组培苗的缓苗继代，30天后长出新芽即可。

步骤b固体培养基为B5+3％蔗糖+1.0mg/LNAA+1.0mg/L6-BA+100mg/L水解酪蛋白+0.2％聚乙烯吡咯烷酮+100mg/L Na₂S₂O₃。

步骤e低温冷藏温度为1-9℃。