[发明专利]同时检测泰乐菌素和替米考星残留分析的免疫胶体金试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于食品药物残留免疫学快速检测技术领域。具体涉及同时检测泰乐菌素和替米考星多残留胶体金免疫层析试纸条及其制备方法。

背景技术

泰乐菌素(TYL)和替米考星(TIL)半合成大环内酯类畜禽专用抗生素，具有很强的抗菌活性，耐药性低，抗菌谱广，对所有的革兰氏阳性菌和部分革兰氏阴性菌、霉形体、螺旋体等均有抑制作用，尤其是对多种支原体及螺旋体也具有很强的抑制作用。在畜牧生产上，泰乐菌素还用作饲料添加剂，促进动物生长。近年来，由于动物疾病流行，泰乐菌素和替米考星在畜牧兽医上应用最多的药物，在兽用的抗生素中占有重要的地位。在生产中，由于不合理的使用剂量和不遵守休药期造成泰乐菌素和替米考星残留，其残留对消费者可产生毒性作用。我国和欧盟分别对泰乐菌素和替米考星在组织中残留也制定了最高残留限量(MRL)。为了控制泰乐菌素和替米考星残留，保障消费者健康，有必要建立一种快速、有效的残留检测方法对其残留进行监测。

现有的泰乐菌素和替米考星残留检测的方法主要为高效液相色谱(HPLC)分离，紫外和质谱检测的仪器方法。虽然仪器方法在鉴定药物种类和定量分析上表现出良好的性能，但由于其操作复杂、分析费用昂贵，而不适用于对大量样品进行残留筛选。ELISA方法灵敏度高、成本低，在药物残留检测中应用也很广泛，但该方法需要酶标仪等实验室设备，分析时间长，在应用中有局限性。

发明内容

为解决以上技术问题，为解决以上技术问题，本发明的目的之一在于提供一种特异性强、灵敏度高、且操作简单，对样品简单处理即可检测TYL、TIL药物残留的免疫胶体金试纸条。

本发明目的之二在于提供一种制备同时检测泰乐菌素和替米考星多残留胶体金免疫层析快速检测试纸条的方法。

本发明目的之一是这样实现的：一种检测喹恶林-2-羧酸药物残留的免疫胶体金试纸，包括背板(2)，该背板(2)上设置手控区、测试区和样品端，所述测试区位于背板(2)中部，所述手控区和样品端位于背板(2)两个端部，其关键在于：所述手控区由吸水垫(3)和手控区封膜(1)组成，所述吸水垫(3)粘附在背板(2)，该吸水垫(3)上表面及外端面和背板(2)外端面粘附手控区封膜(1)，所述测试区为粘附在背板(2)上的硝酸纤维素膜(4)，所述硝酸纤维素膜(4)上包被有兔抗鼠的IgG质控线(5)和包被有DES-BSA检测线(6)，所述样品端由结合垫(7)、样品垫(8)和样品端封膜(9)组成，所述背板(2)上由测试区到外端依次粘附结合垫(7)和样品垫(8)，该样品垫(8)搭在结合垫(7)上，所述样品垫(8)上表面及外端面和背板(2)外端面粘附样品端封膜(9)。

本发明目的之二是这样实现的：检测喹恶林-2-羧酸药物残留的免疫胶体金试纸的制备方法，按如下步骤进行：

1)将半抗原去碳霉糖泰乐菌素与牛血清白蛋白偶联合成偶联物DES-BSA；

2)将步骤1)合成的2种偶联物免疫原免疫小鼠，通过细胞融合筛选得到抗TYL和TIL药物单克隆细胞株，分别将得到单克隆细胞株注射小鼠腹腔，得到抗TYL和TIL药物单抗体，该抗体与TYL和TIL有较高的交叉反应；

3)用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；

4)提取小鼠IgG免疫健康家兔，得到兔抗鼠IgG抗体；

5)将步骤2)制成的抗TYL和TIL单克隆抗体加入步骤3)制备的胶体金中，得到抗TYL和TIL单克隆抗体-胶体金标记物；

6)将抗TYL和TIL单克隆抗体-胶体金标记物包被在结合垫上；

7)将步骤1)合成DES-BSA分别包被在硝酸纤维素膜(4)得到检测线(6)；

8)将步骤4)兔抗鼠IgG包被在硝酸纤维素膜(4)得到质控线(5)；

9)将手控区封膜(1)、吸水垫(3)、硝酸纤维素膜(4)结合垫(7)、样品垫(8)和样品端封膜(9)依次粘贴在背板(2)上。