[发明专利]重组非糖基化人促红细胞生成素及其聚乙二醇修饰化产物的生产方法及用途

权利要求书

1.一种融合基因，其编码SUMO-rh-ngEPO融合蛋白。

2.根据权利要求1所述的融合基因，其具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

3.含有权利要求1或2所述融合基因的表达载体。

4.重组非糖基化人促红细胞生成素（rh-ngEPO）的生产方法，包括如下步骤：

1）将权利要求3所述的表达载体转入宿主菌中，诱导表达SUMO-rh-ngEPO融合蛋白；

2）分离纯化SUMO-rh-ngEPO蛋白，切除SUMO部分，纯化rh-ngEPO蛋白。

5.按照权利要求4的方法所得到的重组rh-ngEPO蛋白。

6.一种聚乙二醇修饰化促红细胞生成素的制备方法，包括如下步骤：

1）将权利要求5所述的rh-ngEPO蛋白与单甲氧基聚乙二醇丙醛（mPEG-ALD）在3~5℃反应20~28小时，加甘氨酸终止反应；

2）分离纯化得到聚乙二醇修饰的人促红细胞生成素（PEG-rh-ngEPO）。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤1）是在pH 6.0，50 mmol/ L 的磷酸盐缓冲液中进行，所述rh-ngEPO蛋白的浓度为4.5~5.5mg/mL。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述rh-ngEPO蛋白与单甲氧基聚乙二醇丙醛的摩尔比为9~11：1。

9.根据权利要求6或8所述的方法，其特征在于，所述单甲氧基聚乙二醇丙醛为20kDa单甲氧基聚乙二醇丙醛（mPEG-ALD-20kDa）。

10.权利要求6~9任一项所述的聚乙二醇修饰化促红细胞生成素在制备促红细胞生成类药物中的应用。