[发明专利]重组人硫氧还蛋白的制备方法

权利要求书

1.一种重组人硫氧还蛋白(rhTrx)的制备方法，其特征在于，该制备方法包含以下步骤：

1)诱导培养重组菌，离心获得菌体；

2)裂菌，离心，收集上清；

3)上清上样于阴离子交换层析柱，收集目的蛋白所在洗脱峰，得到一次纯化产物；

4)将得到的一次纯化产物上样于阳离子交换层析柱，收集目的蛋白所在洗脱峰，得到重组人硫氧还蛋白；

最终获得纯度达95％以上的重组人硫氧还蛋白。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中，当培养至OD600nm达到6-8时，加入终浓度为1mM的IPTG作为诱导剂。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述菌为大肠杆菌BL21(DE3)。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中，加入裂菌缓冲液进行裂菌，菌体和裂菌缓冲液的比例为1g菌体加10ml裂菌缓冲液，所述裂菌缓冲液为STE裂菌缓冲液，该裂菌缓冲液由100mM NaCl、1mM EDTA、pH 8.0的50mM Tris-HCl组成。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中，所述阴离子交换层析柱为DEAE Sepharose Fast Flow层析柱。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4)中，所述阳离子交换层析柱为SP Sepharose Fast Flow层析柱。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中，所述阴离子交换层析柱使用的洗脱缓冲液由20mM Tris-HCl，1mM EDTA，1M NaCl，pH8.0组成。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中，收集目的蛋白所在洗脱峰后，再加150倍体积的透析液，分3次透析，所用透析液由20mM柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，1mM EDTA，pH 4.0组成。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4)中，所述阳离子交换层析柱使用的洗脱缓冲液由20mM柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，1M NaCl，1mM EDTA，pH 4.0组成。

10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4)中，收集目的蛋白所在洗脱峰后，再加150倍体积的PBS，分3次透析。