[发明专利]一种活性灵芝多糖肽对照品、制备方法及应用

权利要求书

1.一种活性灵芝多糖肽对照品，其具有如下特征：

(1)性状：浅褐色至褐色粉末状；

(2)性质：易溶于水，不溶乙醇、丙酮，乙醚等，易受潮；

(3)纯度：99％以上；

(4)峰位分子量(MP)1.06～1.2×10⁴；

(5)化学结构：鼠李糖(Rha)、甘露糖(Man)和葡萄糖(Glc)组成，含17种氨基酸，糖苷键为β-构型；

其主链是1，3-与1，4-两者交替连接的葡萄糖构成，在部分主链葡萄糖的6位有分支，非还原末端均由葡萄糖构成，也含主链由1，6或1，3连接的β-D-Glcp的构成，在部分1.6-的主链葡萄糖的2或3位有分支；

(6)GL-PPS对照品的百分摩尔比：Rha∶Man∶Glc＝1.49∶9.7∶75.4；

(7)分子量范围为5.0×10³～1.5×10⁴。

2.一种活性灵芝多糖肽对照品的制备方法，其步骤如下：

(1)将灵芝子实体挑选，经切成薄片(2～20mm)或破碎后过40～60目筛网，加10～30倍体积的无离子水，于90℃浸泡2小时，90～100℃提取1.5～2.0h，间歇搅拌翻动，以3000～4000rpm离心，去沉淀取提取液，离心后的残渣再加5～10倍原子实体重量的水，反复提取二次，合并提取上清液；

(2)将上清液浓缩至原投料量的5～10倍，离心除去杂质，留清液，流水透析(36MD)48小时，将透析液浓缩一半，再次离心(10000-12000rpm)，除去杂质，留上清液；

(3)向上清透析液中缓慢加入透析液的三倍体积95％乙醇，搅拌均后，置4～5℃冰箱收集沉淀物，将沉淀溶于水，加入其4倍体积无水乙醇，4～5℃放置，离心(10000-12000rpm)，除去清液，沉淀物用丙酮和乙醚洗涤沉淀，置真空低温干燥得赤灵芝多糖肽粗品GL-PP；

(4)用浓度为1％的灵芝多糖肽GL-PP溶液，在不断搅拌中缓慢滴加无水乙醇至1∶0.5(V/v)，置冰箱过夜，离心(10000-12000rpm)，用无水乙醇分级沉淀，收集33％乙醇沉淀部分，置冰箱真空干燥得第1级成分为GL-PP1得率为27～30％；

(5)取步骤(4)上清液再滴加无水乙醇至1∶1(V/v)同上处理，收集33～50％的沉淀，置冰箱真空干燥得第2级成分为GL-PP2得率为20～30％；将上清液继续再加乙醇至1∶1.5(V/v)，得第3级组分GL-PP3得率为20～25％。置真空低温干燥得GL-PP3多糖肽粗品；

(6)取GL-PP3以1∶10比例加水微热溶解，离心10000-12000rpm去杂质，通过聚丙烯胺凝胶Bio-Gel P-10Gel 45～90μm wet柱分离，用含50mol·L^-1NaCl的5.8-6.0pH＝0.02mol/L磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液0.2mol/L收集洗脱液，流水透析12～48h，蒸馏水透析4～12h，取袋内液浓缩，用三倍无水乙醇沉淀，离心，收集沉淀部分，冷冻干燥，得浅褐色粉末状物质为赤芝多糖肽GL-PPZ；

GL-PPZ再以Bio-Gel P-30柱分离同步骤(6)法收集GL-PPS，得率72％。经HPLC检测结果为单一多糖，纯度为99％以上，得率为22％。

3.一种活性灵芝多糖肽对照品在鉴别灵芝类药材或测定灵芝类药材、包含糖肽类产品活性成分多糖肽含量测定中的应用。

4.一种活性灵芝多糖肽对照品在测定灵芝提取物含糖肽类中多糖肽含量。

5.一种活性灵芝多糖肽对照品对照的峰位分子量检测灵芝类产品中峰位分子量，评价《灵芝胶囊》产品质量。