[发明专利]稳定分泌抗人AEG-1单克隆抗体的杂交瘤细胞无效
| 申请号： | 201210017791.X | 申请日： | 2012-01-19 |
| 公开（公告）号： | CN102586192A | 公开（公告）日： | 2012-07-18 |
| 发明（设计）人： | 张惠中;龙敏;董轲;王希 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第四军医大学 |
| 主分类号： | C12N5/20 | 分类号： | C12N5/20;C12N15/06 |
| 代理公司： | 西安通大专利代理有限责任公司 61200 | 代理人： | 陆万寿 |
| 地址： | 710032 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 稳定 分泌 aeg 单克隆抗体 杂交瘤 细胞 | ||
1.稳定分泌抗人AEG-1单克隆抗体的杂交瘤细胞，其特征在于，该杂交瘤细胞保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC C2011117。
2.如权利要求1所述的稳定分泌抗人AEG-1单克隆抗体的杂交瘤细胞，其特征在于，所述的杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体能够识别细胞所表达的AEG-1分子。
3.如权利要求2所述的稳定分泌抗人AEG-1单克隆抗体的杂交瘤细胞，其特征在于，所述的细胞为肿瘤细胞。
4.如权利要求3所述的稳定分泌抗人AEG-1单克隆抗体的杂交瘤细胞，其特征在于，所述的肿瘤细胞为恶性肿瘤细胞。
5.如权利要求4所述的稳定分泌抗人AEG-1单克隆抗体的杂交瘤细胞，其特征在于，所述的恶性肿瘤细胞为宫颈癌细胞或肺癌细胞。
6.稳定分泌抗人AEG-1单克隆抗体的杂交瘤细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
首先将AEG-1胞外段基因克隆于表达载体pGSTag构建pGSTag-AEG-1载体，将重组表达载体pGSTag-AEG-1转化大肠杆菌，利用IPTG诱导目的蛋白表达，超声裂菌，纯化得到具有抗原性的AEG-1胞外段蛋白；
以具有抗原性的AEG-1胞外段蛋白作为免疫原免疫小鼠，取血清效价大于105的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0用50％PEG进行融合，用含有1×HAT和20％小牛血清的RPMI-1640培养，出现融合细胞后收集上清；
以纯化的AEG-1胞外段蛋白包被96孔板，通过ELISA方法进行筛选，保留AEG-1阳性的杂交瘤细胞，在通过有限稀释克隆方法获得稳定分泌抗AEG-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
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