[发明专利]Anti-HBc 定量检测方法及其在监控慢性乙肝患者病情发展和预测治疗疗效中的用途

权利要求书

1.定量检测乙型肝炎病毒核心蛋白抗体水平的试剂在制备用于监控慢性乙型肝炎患者的病情发展和/或在慢性乙型肝炎患者接受抗乙型肝炎病毒治疗前有效预测其治疗效果的诊断剂中的用途。

2.权利要求1所述的用途，其中乙型肝炎病毒核心蛋白抗体的定量检测通过如下方法中的一种或者几种方法来实现：酶联免疫吸附法、化学发光免疫检测法、时间分辨荧光检测法、免疫比浊法、免疫层析法、免疫渗滤法。

3.权利要求1所述的用途，其中乙型肝炎病毒核心蛋白抗体水平的单次检测的线性动力学范围在1.5个数量级以上，亦即单次检测准确定量的上限值高于准确定量的下限值32倍以上。

4.权利要求1所述的用途，其中乙型肝炎病毒核心蛋白抗体的定量检测包括以下步骤：

a)提供可与乙型肝炎病毒核心蛋白抗体特异性结合的乙型肝炎病毒蛋白，该蛋白可以是包含乙型肝炎病毒核心蛋白的全长氨基酸序列(从第1位氨基酸到第183位氨基酸)，也可以是只包含乙型肝炎病毒核心蛋白的主要免疫优势区的氨基酸序列(如从第1位氨基酸到第149位氨基酸)，该蛋白被固相化于固相化载体上，作为固相抗原，用于捕获血清样品中存在的乙型肝炎病毒核心蛋白抗体；

b)提供可与被捕获到固相抗原上的乙型肝炎病毒核心蛋白抗体特异性结合的抗原标记物，该蛋白可以是包含乙型肝炎病毒核心蛋白的全长氨基酸序列(从第1位氨基酸到第183位氨基酸)，也可以是只包含乙型肝炎病毒核心蛋白的主要免疫优势区的氨基酸序列(如从第1位氨基酸到第149位氨基酸)，所标记的信号产生物可以是辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶或吖啶酯；

c)提供用于绘制定量标准曲线的已知浓度的定量标准品，通常为3-6份含不同浓度的乙型肝炎病毒核心蛋白抗体的样品组成。浓度的单位可以是IU/mL，PEIU/mL，也可以是其他可以朔源的浓度或滴度单位；

d)样品(待测样品或定量标准品)与固相抗原相互接触，使得样品中的乙型肝炎病毒核心蛋白抗体，如果存在的话，被捕获，形成固相抗原-乙型肝炎病毒核心蛋白抗体复合物；

e)使抗原标记物与步骤c)的产物，即固相抗原-乙型肝炎病毒核心蛋白抗体复合物相互接触，从而形成固相抗原-乙型肝炎病毒核心蛋白抗体-抗原标记物复合物；

f)使底物或能激发信号产生的溶液也步骤e)形成的固相抗原-乙型肝炎病毒核心蛋白抗体-抗原标记物复合物相互接触，从而生产可测量的信号，并以相应的测定仪器测定所产生的信号强度；

g)将测量得到的定量标准品(通常为3-6份)的信号，与其对应的浓度值进行线性回归拟合，获得由测量信号计算样品浓度的数学公式；

h)将待测样品测量得到的信号，引入步骤g)中得到的公式，从而计算出待测样品含有的乙型肝炎病毒核心蛋白抗体浓度；

i)如果步骤h)中计算出的乙型肝炎病毒核心蛋白抗体浓度高于检测方法能准确定量的量值上限，则需对待侧样品进行稀释，重复步骤a)到h)，直至测定的浓度值落在相应检测方法能准确定量的量值上限和量值下限之间。待测样品含有的乙型肝炎病毒核心蛋白抗体浓度由稀释后测量值×对应稀释倍数计算获得。

5.权利要求1-4任一项的用途，所述诊断剂用于在接受不同治疗药物的慢性乙型肝炎病人中，所述药物包括：长效干扰素(聚乙二醇化的干扰素，Peginterferon)、普通干扰素(Interferon)、拉米夫定(lamivudine，LMV)、阿德福韦酯(adefovir dipivoxil，ADV)、恩替卡韦(Entecavir，ETV)、替比夫定(Telbivudine，LdT)、替诺福韦(Tenofovir)或其他可用于慢性乙型肝炎治疗的药物。

6.权利要求1-4任一项的用途，其中在治疗前预测病人治疗疗效的通常准则是：治疗前患者血清中乙型肝炎病毒核心蛋白抗体水平高的病人治疗所获疗效(应答率)高于治疗前患者血清中乙型肝炎病毒核心蛋白抗体水平低的病人；治疗疗效的判定标准可以是乙型肝炎病毒E抗原血清转换(即接受治疗的慢性乙肝患者由HBeAg(+)/Anti-HBe(-)的状态改变为HBeAg(-)/Anti-HBe(+))，也可以是病毒学应答(即慢性乙肝患者血清HBV DNA载量降至1000Copies/mL以下)，还可以是其他能指示病情缓解或良好预后的临床指标。