[发明专利]对虾传染性肌肉坏死病毒荧光定量PCR检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1. 对虾传染性肌肉坏死病毒荧光定量PCR检测试剂盒，包括盒体（1），盒体（1）内设有管孔支架（5），其特征在于管孔支架（5）上摆放有以下管件：

1）、荧光定量PCR 反应液管（6），内装2×荧光定量PCR buffer、对虾传染性肌肉坏死病毒正反引物及荧光标记的TaqMan探针的混合液；

正向引物序列：5’- GATGG CAGCA CGTCA AAATG -3’ ；

反向引物序列：5’- CAGCT GTTCC TGGGA CTTCC T -3’ ；

TaqMan探针序列：5’-CTATT TCCTC CACTA ATTCA GAGC-3’， 探针序列的5’端用FAM 标记，3’端用TAMRA标记；

2）、去离子水管（3），内装无菌去离子水；

3）、阴性对照管（4），内装SPF（无特定病原体）对虾核酸；

4）、标准品管（2），分别内装传染性肌肉坏死病毒10⁷,10⁶, 10⁵, 10⁴, 10³, 10², 10,1拷贝cDNA阳性克隆。

2.权利要求1所述检测试剂盒用于检测对虾传染性肌肉坏死病毒。

3.采用权利要求1或2所述检测试剂盒对虾传染性肌肉坏死病毒荧光定量PCR检测方法，其特征在于：

（1）荧光定量PCR反应体系：

试剂体积/体系(μl)终浓度荧光定量PCR 反应液11.21×real-time PCR buffer, 0.2μM正反引物， 0.4μM探针标准品或模板cDNA1 无菌去离子水7.8 总体积20-

（2）荧光定量PCR反应：

95℃变性30s，1个循环；

95℃变性5s，62℃退火延伸 20s，40个循环。