[发明专利]CoxBIgG/IgM酶联免疫法检测试剂盒

权利要求书

1.一种CoxB IgG/IgM酶联免疫法检测试剂盒，包括多孔酶联板，分别装有样品稀释液、阳性对照、阴性对照、IgG酶标抗体或IgM酶标抗体、底物A、底物B、浓缩洗涤液和终止液的试剂瓶，所述多孔酶联板的微反应孔的内壁包被有CoxB组抗原。

2.如权利要求1所述CoxB IgG/IgM酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于，多孔酶联板上包被的CoxB组抗原的主要成分为经纯化并完全灭活的Cox B1、Cox B2、Cox B3、Cox B4、Cox B5和Cox B6病毒的混合。

3.如权利要求1所述CoxB IgG/IgM酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于，所述CoxB组抗原采用包括下列步骤的方法制备获得：

1、病毒扩增：将选自Cox B1、Cox B2、Cox B3、Cox B4、Cox B5和Cox B6病毒中之任一的毒种接种至单层的Hela细胞中培养获得细胞病毒液；

2、病毒释放：将细胞病毒液重复冻融三次以上，而后在冰水浴中超声波破碎细胞；

3、病毒灭活：将重复冻融三次以上的细胞病毒液或经超声波破碎细胞的细胞病毒液完灭活，灭活的细胞病毒液经病毒灭活试验检验需呈阴性；

4、病毒抗原纯化：

4.1将经病毒释放与病毒灭活的细胞病毒液置于18-20℃融解适当时间后，加入甲醛水溶液混合均匀，甲醛在混合液中的终浓度为0.12-0.20v％；

4.2混合液梯度离心分离病毒：

4.3分离出的病毒加入保护液获得病毒抗原液；

5、利用步骤1-4分别制备Cox B1、Cox B2、Cox B3、Cox B4、Cox B5和Cox B6的病毒抗原液，将制得的Cox B1、Cox B2、Cox B3、Cox B4、Cox B5和Cox B6的病毒抗原液混合获得CoxB组抗原。

4.如权利要求3所述CoxB IgG/IgM酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于，步骤4.2中，梯度离心分离病毒具体包括下列步骤：

4.2.1混合液低速离心至少20分钟，取上清；

4.2.2上清35000-45000rpm/min离心至少60分钟，取沉淀；

4.2.3沉淀用PBS溶解后，置于13-17wt％甘油水溶液之上，50000-65000rpm/min离心60分钟以上，取沉淀，沉淀即为分离出的病毒。

5.如权利要求4所述CoxB IgG/IgM酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于，步骤4.2.1中，低速离心的离心速度为5000-8000rpm/min。

6.如权利要求4所述CoxB IgG/IgM酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于，步骤4.2.3中，沉淀与PBS的体积比为1∶(2-3)。

7.如权利要求3所述CoxB IgG/IgM酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于，步骤4.3中，所述病毒与保护液的体积比为1∶(1-2)。