[发明专利]CoxBIgG/IgM酶联免疫法检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及CoxB IgG/IgM酶联免疫法检测试剂盒。 

背景技术

柯萨奇B组(CoxB)病毒是肠道病毒的一种，柯萨奇B病毒感染后，可出现无菌性脑膜炎、肌麻庳、疱疹性咽峡炎、心肌炎和心包炎、急性出血性结膜炎等。柯萨奇B组有6个血清型。CoxB IgG/IgM的测定能够及早检测出患者是否新近遭受CoxB病毒感染，特别对急性期的心肌炎进行CoxB IgG/IgM的普查，将对心肌疾病提供诊断依据，特别是CoxB IgM的阳性，将提示患者有可能心肌早期受到感染，同时可配合临床诊断和观察的有利指标，对患者的治疗和康复有着重要的意义。 

目前柯萨奇B组病毒感染的诊断方法主要有三种，病毒分离鉴定、血清学检查及分子生物学技术。病毒分离培养和分子生物学法繁复费事，传统的病毒分离法耗时长，而PCR方法存在检测成本昂贵且对环境交叉污染的风险高，无法满足病毒流行期间同时处理大量样本的需求，快速.准确。血清学的进展(快速法)开拓了该病毒的快速诊断技术，其具有高灵敏度及高特异性的优势，在病毒感染的诊断中发挥了越来越重要的作用。 

发明内容

本发明的目的是克服现有技术中的缺陷，提供一种CoxB IgG/IgM酶联免疫法检测试剂盒。 

本发明采用了下述技术方案来解决上述技术问题： 

一种CoxB IgG/IgM酶联免疫法检测试剂盒，包括多孔酶联板，分别装有样品稀释液、阳性对照、阴性对照、IgG酶标抗体或IgM酶标抗体、底物A、底物B、浓缩洗涤液和终止液的试剂瓶，所述多孔酶联板的微反应孔的内壁包被有CoxB组抗原。 

CoxB IgG/IgM酶联免疫法检测试剂盒即为CoxB IgG或CoxB IgM酶联免疫法检测试剂 盒。 

进一步的，所述多孔酶联板为48孔酶联板或96孔酶联板。 

试剂盒中的样品稀释液也可采用常规的ELISA样品稀释液，如含有磷酸盐缓冲液的样品稀释液，或者也可以为含有0.01M磷酸缓冲液(PBS，pH7.2-7.5)和＜0.1wt％NaN₃的10wt％小牛血清。 

试剂盒中的阳性对照为经病毒灭活的含有CoxB组IgG抗体或CoxB组IgM抗体的阳性血清。 

试剂盒中的阴性对照为阴性血清。 

试剂盒中的IgG酶标抗体为辣根过氧化物酶(HRP)标记的IgG抗体，IgG抗体可以是各种类型的IgG抗体，如鼠抗人IgG、羊抗人IgG或兔抗人IgG。 

试剂盒中的IgM酶标抗体为辣根过氧化酶(HRP)标记的μ链IgM抗体，. 

试剂盒中的底物A、底物B均为常规ELISA底物A和底物B。 

试剂盒中的浓缩洗涤液可采用常规的浓缩的ELISA洗涤液，如含有吐温的磷酸盐缓冲液，或者也可以为20X浓缩的0.01MPBS。 

试剂盒中的终止液可采用常规的ELISA终止液。 

多孔酶联板上包被的CoxB组抗原的主要成分为纯化并完全灭活的Cox B1、Cox B2、Cox B3、Cox B4、Cox B5和Cox B6病毒的混合。各病毒混合比例可根据检测需要任意调整。一般情况下，以病毒总量为基础计，各病毒的重量百分比均为6-20％。 

多孔酶联板上包被抗原的方法采用常规。 

进一步的，所述CoxB组抗原采用包括下列步骤的方法制备获得： 

1)病毒扩增：将选自Cox B1、Cox B2、Cox B3、Cox B4、Cox B5和Cox B6病毒中之任一的毒种接种至单层的Hela细胞中培养获得细胞病毒液； 

2)病毒释放：将细胞病毒液重复冻融三次以上，而后在冰水浴中超声波破碎细胞； 

3)病毒灭活：将重复冻融三次以上的细胞病毒液或经超声波破碎细胞的细胞病毒液完全灭活，灭活的细胞病毒液经病毒灭活试验检验需呈阴性； 

4)病毒抗原纯化： 

4.1将经病毒释放与病毒灭活的细胞病毒液置于18-20℃融解适当时间后，加入甲醛水溶液混合均匀，甲醛在混合液中的终浓度为0.12-0.20v％； 

4.2混合液梯度离心分离病毒： 

4.3分离出的病毒加入保护液获得病毒抗原液。 

5)利用步骤1-4分别制备Cox B1、Cox B2、Cox B3、Cox B4、Cox B5和Cox B6的病毒抗原液，将制得的Cox B1、Cox B2、Cox B3、Cox B4、Cox B5和Cox B6的病毒抗原液混合获得CoxB组抗原。