[发明专利]一组用于结核分枝杆菌实时荧光PCR检测的引物探针及其使用方法

权利要求书

1.一种用于结核分枝杆菌实时荧光PCR检测方法，其特征在于，所述的结核分枝杆菌实时荧光PCR检测方法包括以结核杆菌复合群IS6110序列为目标序列设计并筛选的一组引物探针序列、基于该组引物探针序列所建立的荧光PCR反应体系以及PCR热循环参数。

2.根据权利要求1所述的一组用于结核分枝杆菌实时荧光PCR检测方法的核苷酸序列，其特征在于，序列表SEQ ID NO.1至序列SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列：

SEQ ID NO.1：GTC CAC GCC GCCAAC TAC

SEQ ID NO.2：ATG CCC TCA CGG TTC AGG

SEQ ID NO.3：FAM-CCG CAA AGT GTG GCT A-MGB

其中，EQ ID NO.1和SEQ ID NO.2为荧光PCR检测结核分枝杆菌的引物对；SEQ ID NO.3是荧光PCR检测结核分枝杆菌的探针序列。

3.根据权利要求1所述的基于本发明设计的引物探针序列所建立的荧光PCR反应体系，其特征在于，反应体系的各组分浓度为：

20mM Tris-HCl(pH8.0)，20mM KCl，5mM(NH₄)SO₄，2mM MgCl₂，0.2mM dNTP(dATP，dCTP，dUTP，dGTP或dTTP)，0.4mM引物1，0.4mM引物2，0.2mM探针，1.5U Hot Start Taq emzyme和0.1U UNG酶；

上述PCR反应体系中的引物1、2分别对应为SEQ ID NO.1、2；探针为SEQ ID NO.3。

4.根据权利要求3所述的荧光PCR反应体系所设置的热循环参数，其特征在于：

第一步：37℃5分钟；第二步：95℃10分钟；第三步：95℃15秒，60℃60秒；40个循环。60℃时设置FAM荧光通道采集荧光。