[发明专利]一种依非巴特的制备方法

权利要求书

1.一种依非巴特的制备方法，包括固相多肽合成法制备依非巴特树脂、依非巴特树脂酸解得到依非巴特线性肽粗品、经氧化后得到依非巴特粗品，再经纯化和换盐得到依非巴特成品，其中固相多肽合成法制备依非巴特树脂的方法为：在氨基树脂上通过固相偶联合成法依次接入下列序列中相对应的保护氨基酸或片段，得到依非巴特树脂：

X-Y-Trp(R₁)-Pro-Cys(R₂)-氨基树脂

其中，

R₁为Boc或H；

R₂为Trt或Acm；

X为Mpr(R₂)-Harg(R₃)，R₃为Pbf或H；

Y为Gly-Asp(OtBu)。

2.根据权利要求1所述的依非巴特的制备方法，其特征在于：接入X片段时，仅用1次固相偶联合成反应，偶联所使用的Fmoc-保护氨基酸或片段为Mpr(Trt)-Harg(R₃)-OH，R₃为Pbf或H。

3.根据权利要求1或2所述的依非巴特的制备方法，其特征在于：接入Y片段时，

1)分1次偶联直接接入，Fmoc-保护氨基酸或片段为Fmoc-Gly-Asp(OtBu)-OH；或

2)分2次偶联依次接入，Fmoc-保护氨基酸或片段为：第一次为Fmoc-Asp(OtBu)-OH、第二次为Fmoc-Gly-OH。

4.根据权利要求1-3任一项所述的依非巴特的制备方法，其特征在于：接入X和Y以外的其它的保护氨基酸分别为：Fmoc-Trp(R₁)-OH，R₁为Boc或H；Fmoc-Pro-OH；Fmoc-Cys(R₂)-OH，R₂为Trt或Acm。

5.根据权利要求1-4任一项所述的依非巴特的制备方法，其特征在于：接入各个氨基酸片段时，保护氨基酸的用量为载体树脂总摩尔数的1.2～6倍，优选3倍。

6.根据权利要求1所述的依非巴特的制备方法，其特征在于：所述氨基树脂取代值为0.3～1.5mmol/g树脂，优选的Fmoc-Leu-取代值为0.5～1.0mmol/g树脂。

7.根据权利要求6所述的依非巴特的制备方法，其特征在于：所述氨基树脂选自RinkAmide树脂、Rink Amide AM树脂、Rink MBHA树脂和Sieber树脂中的一种，优选为RinkAmide MBHA树脂。

8.根据权利要求1所述的依非巴特的制备方法，其特征在于：所述固相偶联合成法是：前一步反应得到的保护氨基酸-树脂脱去保护Fmoc后再与下一个保护氨基酸偶联反应，偶联反应时间为60～300分钟，优选的为100～140分钟。

9.根据权利要求1-8任一项所述的依非巴特的制备方法，其特征在于：依非巴特树脂经酸解同时脱去树脂及侧链保护基得到依非巴特线性肽粗品：

Mpr-Harg-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys-NH₂。

10.根据权利要求9所述的依非巴特的制备方法，其特征在于：依非巴特树脂酸解时采用的酸解剂为三氟醋酸(TFA)、1，2-乙二硫醇(EDT)和水混合溶剂，混合溶剂的配比为：TFA的比列为80-95％(V/V)，EDT的比例为1～10％(V/V)，余量为水。

11.根据权利要求1～8任一项所述的依非巴特的制备方法，其特征在于：依非巴特线性肽粗品氧化后得到依非巴特粗品时，依非巴特线性肽先用醋酸溶解，过滤后用氧化剂氧化环化，依非巴特线性肽结构中的Mpr中的巯基SH和Cys中的SH经氧化形成二硫键S-S而得到所述氧化剂为碘、H₂0₂或DMSO中的至少一种。