[发明专利]一种依非巴特的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于多肽药物制备方法技术领域，特别涉及一种新的依非巴特的制备方法。

背景技术

依非巴特(Eptifibatide)是一个合成的环七肽含有6个氨基酸和一个去氨基半胱氨酸(巯基丙酸)。这个药是在一种barbourin结构的基础上发明出来的。这是一种从东南侏儒型响尾蛇(Sistrurus m.barbouri)的蛇毒中发现的多肽。依非巴特(Eptifibatide)是一种新型的血小板糖蛋白IIb/IIIa受体拮抗剂，它通过抑制血小板聚集的最后共同途径，具有抗血小板作用强、起效快、不良反应少等优点。依非巴特(Eptifibatide)和GPIIb/IIIa受体结合的特异性是由于赖氨酸-甘氨酸-门冬氨酸(KGD)这一多肽序列，和整合素配体中存在的多肽序列RGD只有一个氨基酸的区别。此药对GPIIb/IIIa受体有很高的亲合力和很高的特异性，也有快速的离解率。其结果是清除半衰期较短，依非巴特(Eptifibatide)对血小板的抑制容易逆转，在停止滴入药物2至4小时内血小板功能即恢复到基线水平；不像阿昔单抗，依非巴特(Eptifibatide)没有免疫源性，观察到的血小板减少的发生频率和普通肝素相似。

依非巴特(Eptifibatide)是一种特异性GPIIb/IIIa受体阻滞剂，在ACS病人中剂量依赖性地抑制体外血小板的聚集，在健康志愿者和行PCI术的病人中能抑制纤维原与二磷酸腺苷(ADP)活化的血小板的结合。本品对血小板糖蛋白IIb/IIIa受体的阻滞是可逆的，一旦出现不良反应可立即停药，不良反应轻。

依非巴特具有以下的结构：

Mpr-Harg-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys-NH₂

有关依非巴特的制备方法，国内外有报道。中国专利CN200910247949报道了依非巴特的Fmoc固相合成法，采用氨基树脂为开始的载体树脂，依次接入保护氨基酸，所得肽树脂采用三氟醋酸(TFA)酸解。

在本产品结构中有1Harg和1个Gly，在固相法依次接入Fmoc-Gly过程中，由于Gly自身的特性和保护Harg结构的特性，在产品制备过程产生易产生以下杂质：[+1Gly]-依非巴特、[-1Gly]-依非巴特、和[-1Harg]-依非巴特，从使粗品纯度大幅度降低，而这些杂质与依非巴特自身的极性相近，增大了纯化的难度，产品总收率无法得到有效提高，同时影响产品纯度，影响用药的安全性。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供依非巴特的制备方法，该制备方法使用了新的保护氨基酸片段，直接避免了[+1Gly]-依非巴特、[-1Gly]-依非巴特、[-1Harg]-依非巴特杂质的产生，提高了产品收率和纯度，反应效率高、有利于实现规模化的固相合成工艺。

本发明依非巴特的制备方法，包括固相多肽合成法制备依非巴特树脂、依非巴特树脂酸解得到依非巴特线性肽粗品、经氧化后得到依非巴特粗品，再经纯化和换盐得到依非巴特成品，其中固相多肽合成法制备依非巴特树脂的方法为：在氨基树脂上通过固相偶联合成法依次接入下列序列中相对应的保护氨基酸或片段，得到依非巴特树脂：

X-Y-Trp(R₁)-Pro-Cys(R₂)-氨基树脂

其中，

R₁为Boc或H；

R₂为Trt或Acm；

X为Mpr(R₂)-Harg(R₃)，R₃为Pbf或H；

Y为Gly-Asp(OtBu)。

作为本发明优选的方案，接入X片段时，仅用1次固相偶联合成反应，偶联所使用的Fmoc-保护氨基酸或片段为Mpr(Trt)-Harg(R₃)-OH；

作为本发明优选的方案，接入Y片段时，

1)仅用1次偶联直接接入，Fmoc-保护氨基酸或片段为Fmoc-Gly-Asp(OtBu)-OH；或

2)分2次偶联依次接入，Fmoc-保护氨基酸或片段为：第一次为Fmoc-Asp(OtBu)-OH、第二次为Fmoc-Gly-OH。

本发明接入X和Y以外的其它片段时保护氨基酸分别为：Fmoc-Trp(R₁)-OH，R₁为Boc或H；Fmoc-Pro-OH；Fmoc-Cys(R₂)-OH，R₂为Trt或Acm。