[发明专利]抗肿瘤坏死因子α的人源化抗体

说明书

技术领域

本发明涉及至少一种抗肿瘤坏死因子-α(TNFα)或其片段的人源化抗体，包括其特定部分或变体，以及编码所述抗TNFα人源化抗体的核酸、其互补核酸、载体、宿主细胞及其制备方法和包含所述抗TNFα人源化抗体的组合物、试剂盒及其应用。

背景技术

人肿瘤坏死因子-α(TNFα)是由单核细胞和巨噬细胞产生的一种促炎性细胞因子，最初生成的是26kDa的前体蛋白，N端在胞内，C端在胞外，称为跨膜型TNFα，Pennica等1984年首先克隆了TNF-α基因cDNA，并推导出人TNF-α分子由157个氨基酸组成，其分子量约为17KD(Pennica D，et al，Nature 1984；312：724)。人TNFα有两种分子形式，即TNFα和TNFβ.TNFα是由激活的巨噬细胞或单核细胞产生，可引起肿瘤组织出血坏死，也称恶病质素；TNF-β主要由活化的T淋巴细胞分泌，两者有相似致热性。TNFα作用于瘤细胞表面的受体，通过对细胞的识别、结合、内吞进入溶酶体，致溶酶体和蛋白酶类高度活化导致细胞死亡，它在免疫反应、炎症和对损伤反应中起重要作用，主要影响细胞增殖和细胞凋亡的调节，不仅对肿瘤细胞有细胞毒性、细胞溶解、诱导细胞凋亡、抑制增殖等作用，还能够促进髓样白血病细胞向巨噬细胞分化，提高中性粒细胞的吞噬能力。

适量的TNFα能激活免疫系统从而增强机体的免疫力，能够在宿主抵抗微生物入侵和抑制肿瘤产生的防御系统中起着关键作用。但过量的TNFα表达时，可以与其它炎性因子一起产生多种病理损伤，因此可在不同水平上抑制或中和TNFα的活性，使其不能达到受体，进而避免信号传导引发的后果。

为试图克服使用非人源抗体造成的相关问题，通过构建的人-鼠嵌合抗体来降低HAMA引发的机体免疫原性，已成为较为有效的治疗策略。此种嵌合抗体就是将非人源抗体可变区移植到人抗体恒定区，保留了非人源抗体原有的重链、轻链可变区的氨基酸序列(参见，Daddona，P.E等的PCT公开WO92/16553号，Le，J.等人的美国专利5,919,452号，Kang，Heui H等PCT公开WO2005/047329号，金伯泉等的中国专利公开CN1544466A号)，金宜慧等中国专利公开CN101177453号提供了一种新的与人肿瘤坏死因子结合和嵌合抗体，此种嵌合抗体相对于非人源抗体，其免疫原性虽有所降低，但是，由于嵌合抗体中鼠源化程度依然较高，从而可能导致不同程度的HAMA应答反应，具体表现为皮肤黏膜反应、变态反应、心律失常和心绞痛、肾功能不全，严重时甚至可能造成昏迷，此类嵌合抗体的临床应用受到了很大的限制。

通过临床试验证明，此种嵌合抗体作为异种蛋白作用于人体后，可引起机体免疫系统对该异种蛋白的免疫排斥反应，即人抗鼠抗体(Human anti mouse antibody，HAMA)应答反应，该反应会使鼠源单抗在人体内往往被快速清除，其半衰期也较短，重复用药甚至可能导致病人严重的过敏性休克。而且，这些外来抗体可能受到免疫抗体的攻击，其结果使得他们在呈现药效之前被中和掉。

发明人在上述专利技术基础上进行了开发，为了尽可能的降低在嵌合抗体中的鼠源部分，可利用基因工程技术制备人源化抗体，即，将鼠源抗体重链可变区、轻链可变区的互补决定区(Complementarity determining reign，CDRs)分别移植到人抗体骨架区(Framework region，FR)，由此获得的人源化抗体在其结构上尽可能接近人类序列的同时，也能维持其与亲本非人源抗体相似的CDR构象。相对于亲本非人源抗体和嵌合抗体，改造后的人源化抗体来源于亲本非人源氨基酸序列减少，一方面保持了抗体识别抗原的能力；另一方面，极大降低了鼠源性抗体的免疫原性，从而提高了抗体在临床应用的安全性。

因此，本发明提供了一种比现有技术中的小鼠嵌合抗体更加安全可靠的，在人体内半衰期更长、功能更显著的人源化抗体。

发明内容

本发明的一方面提供了如本文所描述的至少一种抗肿瘤坏死因子人源化单克隆抗体及特定的互补决定区(CDR)、重链或轻链可变区、重链或轻链恒定区、构架区或其任意部分。本发明的抗体可以包括或来源于任何哺乳动物，例如，但不限于人、小鼠、大鼠、啮齿类动物、灵长类动物或其任意组合等。