[发明专利]花生根尖细胞染色体有丝分裂中期的制片方法

权利要求书

1.一种花生根尖细胞染色体有丝分裂中期的制片方法，其特征是：该方法包括以下步骤：

（1）预处理：选取长10-15 mm、粗0.8-1.2 mm的新鲜花生根尖，用对二氯苯饱和水溶液室温浸泡处理； 

（2）固定：将花生根尖放入卡诺氏固定液中，室温处理12-24h，放入-20℃冰箱中，待用；

（3）醋酸压片：取固定好的花生根尖，用体积浓度为45%的醋酸浸泡30-60秒，待根尖膨胀饱满后，切取分生区根尖0.3-0.6 mm置于载玻片上，滴一滴所述醋酸，盖上盖玻片，调整根尖至盖玻片正中位置，用双面刀片垫起盖玻片一角，用解剖针垂直在盖玻片中央敲击一下，再在盖玻片上根尖四周垂直敲击5-8次，使材料细胞分散，然后将载玻片放在酒精灯的外焰火烤解离软化细胞壁，火烤时间以盖玻片上雾状散开为宜，用滤纸垫在盖玻片上吸去多余醋酸，用拇指垂直向下压盖玻片，然后在相差显微镜下进行观察；

（4）冰冻揭片：将处于有丝分裂中期、染色体平整分散细胞的制片放置于-70~-80℃的超低温冰箱中冰冻12-24h，用双面刀片快速揭开盖玻片，将载玻片放入无水乙醇中脱水12-24h，最后吹干无水乙醇，待用；

（5）染色体染色分带或荧光原位杂交。

2.如权利要求1所述的制片方法，其特征是：所述用对二氯苯饱和水溶液室温浸泡处理的时间为3h。

3.如权利要求1所述的制片方法，其特征是：所述卡诺氏固定液的成分为：酒精:冰醋酸的体积比为3:1。

4.如权利要求1所述的制片方法，其特征是：所述处于有丝分裂中期、染色体平整分散的细胞数目为10个以上。

5.如权利要求1所述的制片方法，其特征是：所述染色分带是将吹干无水乙醇的载玻片在1×PBS中浸泡10分钟，同时在995μL DAPI缓冲液中加入5μL 浓度0.1mg/ml的DAPI母液，混匀，处理完毕后每片加500μL DAPI染液，染色2分钟，用1×PBS冲洗4-5次，滴加胶液，盖上盖玻片，用滤纸吸去多余的胶液；在荧光显微镜下用450～490 nm激发光波长观察，摄取图象。

6.如权利要求1所述的制片方法，其特征是：所述花生根尖细胞用芝麻、水稻、玉米、大豆、青豆或番茄的根尖细胞来替代。