[发明专利]基因工程菌、用其制备重组S-腺苷同型半胱氨酸水解酶的方法及该酶的应用

权利要求书

1.一种基因工程菌，其特征在于：该基因工程菌命名为大肠埃希氏菌(Escherichia coli)，保藏编号为CGMCC No.5654，保藏日期：2011.12.26，保藏在中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心；是通过PCR技术从环境基因组文库中筛选获得一高活性的S-腺苷高半胱氨酸水解酶基因，插入到含有T7强启动子的PET28质粒中，化学转化导入大肠杆菌BL21中，获得高效表达AdoHcyase的基因工程菌。

2.根据权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于：所述的S-腺苷高半胱氨酸水解酶基因具有SEQ ID.No.1所示核苷酸序列和由上述核苷酸序列编码的如SEQ ID.No.2所示的氨基酸序列。

3.一种利用权利要求1或2所述的基因工程菌制备重组S-腺苷同型半胱氨酸水解酶的方法，其特征在于：该水解酶的制备步骤包括：

(1)将保藏在中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，命名为大肠埃希氏菌(Escherichia coli)，保藏编号为CGMCC No.5654，保藏日期：2011.12.26的基因工程菌接入到含有50～200mg/L卡拉霉素的2YT或LB液体培养基中，10～37℃培养至OD600为0.4～0.8时，然后加入终浓度为0.1～1.0mmol/L IPTG诱导，10～37℃继续培养18～32h；

或将基因工程菌直接接入到乳糖自诱导培养基中，乳糖含量为0.1～10％，10～37℃培养24～72h；

(2)将步骤(1)所得培养液于5000～10000rpm离心20～40min，收集菌体，加入菌体体积1～20倍、pH6.5～8.0的磷酸盐缓冲液，破碎菌体；破碎后在10000～18000rpm离心20～50min，收集上清液，过阳离子交换树脂，用0～500mmol/L浓度不同梯度NaCl盐溶液洗脱；或者过疏水层析，用0～400mmol/L浓度不同梯度NaCl盐溶液洗脱；分部收集，回收含有酶活的部分；

(3)在收集含有酶活溶液中加入终浓度为0.1～5％的保护剂，然后置于-20℃预冷10～50h，再在-40～-60℃、30～100Pa下冷冻干燥24～72h，得到酶制剂。

4.根据权利要求3所述的重组S-腺苷同型半胱氨酸水解酶的制备方法，其特征在于：步骤(3)中所述的保护剂为蔗糖、海藻糖、甘露醇、聚乙二醇、甘油中的一种或两种。

5.一种权利要求1所述的重组S-腺苷同型半胱氨酸水解酶在L-同型半胱氨酸检测试剂盒中的应用。