[发明专利]一种阿托西班的纯化方法

说明书

技术领域

本发明属于药物化学技术领域，尤其涉及一种阿托西班的纯化方法。

背景技术

阿托西班，英文名Atosiban，化学名称为：1-(3-硫醇丙醇酸)-2-(0-乙基-D酪氨酸)-4-L-苏氨酸-8-L-鸟氨酸-催产素。阿托西班是人工合成的环状多肽，肽链中包含三个非天然氨基酸D-Tyr(Et)，Mpa和Orn及一对在Mpa与Cys之间成环的二硫键，分子式为C₄₃H₆₇N₁₁O₁₂S₂，分子量为994.19，其结构式如下：

阿托西班是妇产科药物中的一种突破产品，它是一种催产素类似物，是子宫内基蜕膜、胎膜上受体的催产素竞争性拮抗剂，可以直接与催产素竞争催产素受体，抑制催产素和催产素受体结合，从而直接抑制催产素作用于子宫，抑制子宫收缩；也可以抑制磷脂酰肌醇的水解作用，阻断第二信使的生成以及Ca2+的活动，从而间接抑制子宫对催产素的反应，使子宫收缩得到抑制，达到保胎的目的。在过去的几年，许多临床试验已经评估其疗效和安全性。阿托西班能快速地抑制宫缩，延长妊娠，推迟不足月分娩，而对母亲，胎儿和婴儿没有不良影响。因此阿托西班在临床上有很好的应用前景，具有很高的开发价值。

目前，国内外关于阿托西班合成工艺方法的报道有很多。如通过Boc保护的甘氨酸(Gly)和氯甲基树脂制备得到氨基酸树脂，然后通过循环缩合偶联其余的保护氨基酸得到肽树脂，肽树脂经氨解后得到全保护肽，通过钠氢脱解去侧链保护集团，进行碘环化得到目的肽。再如用TEA裂解得到酰胺键的RinkAminde树脂作为起始树脂，选用Fmoc固相合成方法。然而，上述方法所得阿托西班目的肽纯度均较低，达不到产业化要求，应用价值不高。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种阿托西班的纯化方法。

为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：

一种阿托西班的纯化方法，包括以下步骤：

步骤1、以50v/v％～100v/v％的醋酸水溶液溶解阿托西班粗肽，过滤收集滤液，按照不小于阿托西班粗肽重量的2％的比例加入三价铁离子盐，然后用水将粗肽溶液中的醋酸比例稀释到50v/v％以下；

步骤2、高效液相色谱法分离步骤1所得粗肽溶液，以十八烷基硅烷或八烷基硅烷键合硅胶为固定相，步骤1所得粗肽溶液上样后，以高氯酸盐水溶液和乙腈的混合溶液为流动相，在乙腈体积比20％～40％范围内线性梯度洗脱，收集洗脱液，得到阿托西班高氯酸盐溶液，其中所述高氯酸盐水溶液为pH2.5～pH3.2的高氯酸盐体积比为0.1v/v％～0.8v/v％的溶液；

步骤3、采用反相高效液相色谱法将步骤2得到的阿托西班高氯酸盐溶液转成醋酸盐溶液，即得。

本发明所述阿托西班粗肽是指采用液相合成法或固相合成法以及其它方法制得的、未经过精制处理的阿托西班或者纯度不能满足药用的阿托西班。

优选的，本发明步骤1所述50v/v％～100v/v％的醋酸水溶液以不大于100g/L浓度溶解阿托西班粗肽。在一个具体实施例中，所述阿托西班粗肽的浓度为100g/L，即每100g阿托西班粗肽加入1L 50v/v％～100v/v％的醋酸水溶液。

本发明所述纯化方法步骤1先将阿托西班粗肽溶解，然后以三价铁离子盐作为还原剂对阿托西班粗肽溶液进行处理，除去其中的未氧化完全的杂质。其中所述三价铁离子盐优选为氯化铁或硫酸铁。

本发明所述三价铁离子盐的加入量不小于阿托西班粗肽重量的2％，即每100g阿托西班粗肽加入2g或2g以上的三价铁离子盐。优选的，所述三价铁离子盐的加入量为阿托西班粗肽重量的4％～8％，即每100g阿托西班粗肽加入4～8g三价铁离子盐。

本发明所述纯化方法，在三价铁离子盐还原剂对阿托西班粗肽溶液进行处理后用水将粗肽溶液中的醋酸比例稀释到50v/v％以下。优选的，所述稀释后的粗肽溶液中醋酸的比例为30v/v％～40v/v％。

本发明所述纯化方法步骤2利用高效液相色谱法分离步骤1所得粗肽溶液，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，步骤1所得粗肽溶液上样后，以高氯酸盐水溶液和乙腈的混合溶液为流动相洗脱，收集洗脱液，得到阿托西班高氯酸盐溶液。

本领域技术人员可以根据纯化阿托西班粗肽的量，选择不同规格大小(柱子直径×长度)的色谱柱纯化如5cm×25cm规格色谱柱、15cm×25cm规格色谱柱、30cm×25cm规格色谱柱或45cm×25cm规格色谱柱。