[发明专利]鱼干扰素的制备及纯化方法

权利要求书

1.一种制备鱼干扰素的方法，包括以下步骤：

1)将鱼干扰素的成熟肽基因转入原核表达菌株中得到表达所述鱼干扰素的成熟肽基因的包涵体；

2)提取步骤1)得到的所述包涵体，加入到复性液中使所述包涵体复性；

3)分离纯化步骤2)得到的复性的所述包涵体，得到所述鱼干扰素；

所述复性液为由100mM Tris·Cl、400mM L-精氨酸、2mM EDTA、5mM还原型谷胱甘肽和0.5mM氧化型谷胱甘肽组成的水溶液；所述复性液的pH为8.0。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中所述原核表达菌株为Rosetta(DE3)。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述鱼干扰素的成熟肽基因通过如下重组质粒转入所述原核表达菌株中：所述鱼干扰素的成熟肽基因连接到质粒pET-21a(+)上得到的表达所述鱼干扰素的成熟肽基因的重组质粒。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中所述复性是在4℃条件下进行的，且所述包涵体在所述复性液中的浓度为120μg/ml。

5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述步骤3)中所述分离纯化是将所述复性的所述包涵体首先经过分子筛分离得到含有所述鱼干扰素的组分，然后将所述组分进行离子交换层析，得到所述鱼干扰素。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述分子筛所使用的介质为Superdex75，洗脱液为pH8.0的20mM的Tris溶液，层析柱的柱长度与柱内径之比为30∶1。

7.根据权利要求1-6中任一所述方法，其特征在于：所述鱼干扰素为石斑鱼α干扰素、虹鳟α干扰素、斑马鱼干扰素、草鱼干扰素和牙鲆干扰素。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述石斑鱼α干扰素的成熟肽的氨基酸序列为序列表中的序列2，所述虹鳟α干扰素的成熟肽的氨基酸序列为序列表中的序列4。

9.根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于：所述石斑鱼α干扰素的成熟肽的基因序列为序列表序列1的第4位至第483位的核苷酸序列，所述虹鳟α干扰素的成熟肽的基因序列为序列表序列3的第4位至第495位的核苷酸序列。