[发明专利]一种纯化固相合成利拉鲁肽粗肽的方法

权利要求书

1.一种纯化固相合成利拉鲁肽粗肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1：取固相合成的利拉鲁肽粗肽溶于乙腈水溶液中获得粗肽溶液；

步骤2：取所述粗肽溶液，以八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以含有0.1～0.2％三氟醋酸的异丙醇水溶液为A相，含有0.1～0.2％三氟醋酸的乙腈为B相，梯度为20～40％B→40～60％B，进行第一HPLC纯化，线性梯度洗脱，收集目的峰获得第一馏分；

步骤3：取所述第一馏分，以氰基硅烷键合硅胶为固定相，以质量浓度为0.05～0.15％高氯酸的水溶液为A相，质量浓度为0.05～0.15％高氯酸的乙腈为B相，梯度为40％B→70％B，进行第二HPLC纯化，线性梯度洗脱，收集目的峰获得第二馏分；

步骤4：取所述第二馏分，以八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以质量浓度为0.01～0.06％氨水的水溶液为A相，色谱纯乙腈为B相，梯度为30％B→60％B，进行第三HPLC纯化，线性梯度洗脱，收集目的峰获得第三馏分；

步骤5：取所述第三馏分经减压旋蒸浓缩、冷冻干燥，即得。

2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述乙腈水溶液中乙腈与水的体积比为10～30∶70～90。

3.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述异丙醇水溶液中异丙醇与水的体积比为15～35∶65～85。

4.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤2、步骤3或步骤4中，所述第一HPLC纯化、所述第二HPLC纯化或所述第三HPLC纯化的流速为55～2000ml/min。

5.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤2、步骤3或步骤4中，所述第一HPLC纯化、所述第二HPLC纯化或所述第三HPLC纯化的流速为55～500ml/min。

6.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤2或步骤3中所述线性梯度洗脱时间为40min。

7.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤4中所述线性梯度洗脱时间为30min。

8.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤5中所述减压旋蒸浓缩后浓度为50～70mg/ml。

9.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述固相合成为在活化剂系统的存在下，由树脂固相载体和N端Fmoc保护的甘氨酸偶联得到Fmoc-Gly-树脂；通过固相合成法，按照利拉鲁肽主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，其中赖氨酸侧链采用Alloc保护；脱除赖氨酸侧链保护基Alloc；通过固相合成法，在赖氨酸侧链偶联Palmitoyl-Gllu-OtBu；裂解，脱除保护基和树脂得到利拉鲁肽粗肽。