[发明专利]从臭马比木的嫩叶和嫩枝中提取喜树碱和9-羟甲基喜树碱的方法

权利要求书

1.一种从臭马比木的嫩叶和嫩枝中提取喜树碱的方法，其步骤包括：

预处理：选取新鲜的臭马比木嫩叶和嫩枝，干燥后研磨成粉末；

发酵：按酶料比1.5：1(w/w)加入发酵液，发酵1~3天；发酵温度为20~37℃，所述发酵液为安琪高糖干酵母或发利干酵母，其浓度为1~11‰(w/w)；

提取：在发酵产物中按0.5~3：1(w/w)的比例加入提取液，加热提取；所述提取液为浓度为10~90%的乙醇溶液；所述加热提取的温度控制在40~75℃之间；

过滤：滤取上清液，即得提取液；

（5）、浓缩：在上述提取液中加入0.5~10%（W/V）的二氧化硫和硫酸亚铁，浓缩，得浓缩物；

（6）、萃取：在浓缩物中加入萃取剂对浓缩物进行萃取，并回收萃取剂，得到萃取浓缩物，所述萃取剂为石油醚或二氯甲烷；

（7）、纯化：在萃取浓缩物中加入10%~90%的丙酮溶液，先采用硅胶柱层析，初步结晶度达到70%左右；再进行低压柱层柱，结晶纯度达到80%左右；再采用FLASH中压柱层析，收集洗脱液，其结晶纯度达到95%左右；最后进行重结晶，得到纯度为99%成品。

2.根据权利要求1所述的一种从臭马比木的嫩叶和嫩枝中提取喜树碱的方法，其步骤：（1）所述的发酵液为安琪高糖干酵母或发利干酵母，其浓度为1~11‰(w/w)。

3.根据权利要求1或2所述的一种从臭马比木的嫩叶和嫩枝中提取喜树碱的方法，其步骤（6）所述的萃取剂为石油醚或二氯甲烷。

4.根据权利要求1或2所述的一种从臭马比木的嫩叶和嫩枝中提取喜树碱的方法，其步骤（7）所述的重结晶是在洗脱液中按3：2：6的比例加入甲醇、丙酮、二甲基甲酰胺 (w/w)进行重结晶。

5.一种从臭马比木的嫩叶和嫩枝中提取9-羟甲基喜树碱的方法，其步骤包括：

（1）预处理：选取新鲜的臭马比木嫩叶和嫩枝，干燥后研磨成粉末；

（2）发酵：按酶料比1.5：1加入发酵液，发酵1~3天；发酵温度为20~37℃，所述发酵液为安琪高糖干酵母或发利干酵母，其浓度为1~11‰(w/w)；

（3）提取：在发酵产物中加入提取液，加热提取；所述提取液为乙醇溶液，其浓度为：10~90%，所述加热提取，温度控制在40~75℃之间；

（4）浓缩：在上述提取液中加入0.5~10%的二氧化硫和硫酸亚铁（抗氧化剂），浓缩，得浓缩浸膏；

（5）萃取：在浓缩物中加入萃取剂对浓缩物进行萃取，并回收萃取剂，得到萃取浓缩物，

所述萃取剂为石油醚或二氯甲烷；

（6）分离：在萃取浓缩物中加入丙酮溶液，搅拌均匀后静置12~48小时，抽滤，保留滤液与滤饼；将滤饼用丙酮或乙酸乙酷或氯代甲烷溶解，搅伴后再次抽滤，回收滤液，两次滤液混合，得到的滤液为含9-羟甲氢基喜树碱的粗品；

（7）纯化：将9-羟甲氢基喜树碱的粗品进行柱层析，分段收集洗脱液进行HPLC检测，纯度大于98%的组分直接浓缩干燥，粉碎，得到成品；纯度小于90%重复柱层析；纯度在90%~98%间的加丙酮进行重结晶，直到9-羟甲氢基喜树碱的纯度大于等于98%，晶体干燥粉碎，得到成品。