[发明专利]一种液体蛋白质浓度检测方法

权利要求书

1.一种液体蛋白质浓度检测方法，其方法是：

试剂组成是

以TMB为底物的实验步骤

实验试剂

a、三价铁卟啉试剂，4-20μM/L；

b、pH 7.4PBS：KH₂PO₄0.2g，Na₂HPO₄.12H₂O 2.9g，NaCL 8.0g，KCL 0.2g，加水至1L；

c、四甲基联苯胺使用液，TMB0.5mL，底物缓冲液10mL，0.75％H₂O₂32μL；

d、终止液，蒸馏水178.3mL，逐滴加入浓硫酸21.7mL；

实验方法

将三价铁卟啉试剂与不同浓度的蛋白样品用PBS稀释并混匀，在96孔板上每孔加入100μL与蛋白混合液，此时每孔内三价铁卟啉试剂的浓度在4-20μM/L，既每孔内含0.2-1μg次血红素或0.4-2μg次血红素六肽，然后每孔100μL加入TMB使用液，此时三价铁卟啉试剂的终浓度为2-10μM/L；反应开始10min后，每孔加入50μL终止液，然后酶标仪检测450nm吸光值；

操作过程

①将液体样品加入到装有三价铁卟啉试剂的试管中，室温下10分钟；

②向①试管中分别加入过氧化氢试剂和鲁米诺试剂，将试管中液体移至发光检测仪中，室温下1分钟进行反应前光子计数；

③室温下5分钟时，进行反应后光子计数，计算反应前后光子数的变化，定量测定出待测液体样品中蛋白质的含量。

2.一种液体蛋白质浓度检测方法，其方法是：

试剂组成是

以鲁米诺为底物的实验步骤

实验试剂

a、三价铁卟啉试剂，4-20μM/L；

b、pH 7.4PBS，KH₂PO₄0.2g，Na₂HPO₄.12H₂O 2.9g，NaCL 8.0g，KCL 0.2g，加水至1L；

c、鲁米诺使用液，称取定量鲁米诺加于PBS中，然后放入超声波发生器中10秒钟，取出后加1滴三乙胺助溶，过滤后即可使用；使用时鲁米诺用PBS稀释一百倍，加入双氧水至终浓度100mM；

实验方法

将三价铁卟啉试剂与不同浓度的蛋白样品用PBS稀释并混匀，在96孔板上每孔加入100μL三价铁卟啉试剂与蛋白混合液，此时每孔内三价铁卟啉试剂的浓度在4-20μM/L，既每孔内含0.2-1μg次血红素或0.4-2μg次血红素六肽，然后每孔100μL加入鲁米诺使用液，此时三价铁卟啉试剂的终浓度为2-10μM/L；加完后马上用酶标仪检测化学发光值；

操作过程

①将液体样品加入到装有三价铁卟啉试剂的试管中，室温下10分钟；

②向①试管中分别加入过氧化氢试剂和鲁米诺试剂，将试管中液体移至发光检测仪中，室温下1分钟进行反应前光子计数；

③室温下5分钟时，进行反应后光子计数，计算反应前后光子数的变化，定量测定出待测液体样品中蛋白质的含量。