[发明专利]一种产毒微囊藻特异性多重PCR检测方法及其试剂盒

权利要求书

1.一种产毒微囊藻特异性多重PCR检测方法，包括如下步骤：

(1).从检测地取样微囊藻，并提取基因组DNA，

(2).设计并合成微囊藻包括产毒和非产毒株的ropC1基因和产毒微囊藻mcyA、mcyB、mcyD、mcyE、mcyI、mcyJ基因片段的7对引物：

引物       序列(5’→3’)

rpoC1 TCF1  CAGTTATCTCAGTATCCTGCTCG，

rpoC1 TCR1  ACTTCATCCAAGACGTGCC；

mcyA TCF1   GCATCGGAGACAGAAACAGG，

mcyA TCR1   AAGTTACCCAAACCGAAAGG；

mcyB TCF1   CCAAACTGGTGCCGAATC，

mcyB TCR1   CAAGATGACAAAGGCAGAAGG；

mcyD TCF1   GCCATTTAGAAGGTGCTGC，

mcyD TCR1   GGCTGAGTGATTTGGGTTTC；

mcyE TCF1   CAAACTGCTCCAGGTATCATTG，

mcyE TCR1   TGAGTCTGGGAGATTAAAGTCG；

mcyI TCF1   TTGGTACTCTGGTGGCTCAC，

mcyI TCR1   CTCCTCCTGAAGCACTTGTAAT；

mcyJ TCF1   TGACCGCTTTAGAATGTGCT，

mcyJ TCR1   ACTAATTCCTTGGCTAATCTGG。

(3).使用上述设计的特异性引物分别进行PCR扩增反应，最后进行电泳凝胶检测。

2.根据权利要求1所述的一种产毒微囊藻特异性多重PCR检测方法，其特征在于，所述的微囊藻种类包括但不限于铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)、绿色微囊藻(Microcystis viridis)、惠氏微囊藻(Microcystis wesenbergii)、水华微囊藻(Microcystis flos-aquae)、华美微囊藻(Microcystis elabens)、鱼害微囊藻(Microcystis ichthyoblabe)。

3.一种产毒微囊藻特异性多重PCR检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括如下的引物：

引物        序列(5’→3’)

rpoC1 TCF1  CAGTTATCTCAGTATCCTGCTCG，

rpoC1 TCR1  ACTTCATCCAAGACGTGCC；

mcyA TCF1   GCATCGGAGACAGAAACAGG，

mcyA TCR1   AAGTTACCCAAACCGAAAGG；

mcyB TCF1   CCAAACTGGTGCCGAATC，

mcyB TCR1   CAAGATGACAAAGGCAGAAGG；

mcyD TCF1   GCCATTTAGAAGGTGCTGC，

mcyD TCR1   GGCTGAGTGATTTGGGTTTC；

mcyE TCF1   CAAACTGCTCCAGGTATCATTG，

mcyE TCR1   TGAGTCTGGGAGATTAAAGTCG；

mcyI TCF1   TTGGTACTCTGGTGGCTCAC，

mcyI TCR1   CTCCTCCTGAAGCACTTGTAAT；

mcyJ TCF1   TGACCGCTTTAGAATGTGCT，

mcyJ TCR1   ACTAATTCCTTGGCTAATCTGG。

4.根据权利要求3所述的一种产毒微囊藻特异性多重PCR检测试剂盒，其特征在于，所述可检测的产毒微囊藻种类包括但不限于铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)、绿色微囊藻(Microcystis viridis)、惠氏微囊藻(Microcystis wesenbergii)、水华微囊藻(Microcystis flos-aquae)、华美微囊藻(Microcystis elabens)、鱼害微囊藻(Microcystis ichthyoblabe)。