[发明专利]一种蛇伤快速鉴别的方法

权利要求书

1.一种蛇伤快速鉴别的方法，其特征步骤在于按如下步骤进行：

(1)制备抗蛇毒免疫球蛋白(IgG)。选取所需鉴别的6种蛇毒(眼镜蛇、银环蛇、五步蛇、蝮蛇、竹叶青和烙铁头蛇毒)，皮下多点注射大鼠，制备6种多克隆抗蛇毒粗血清。粗血清先经过硫酸铵沉淀去除非蛋白组分，再通过Hitrap protein IgG柱纯化，获得抗蛇毒IgG。

(2)筛选蛇毒物种特异性IgG。将蛇毒偶联至活化的CNBr-activated sepharose 4B亲和介质上，等量任取5种蛇毒偶联后的湿润亲和介质共0.3g混合后装入离心浓缩管内管。室温下，500μg的每种蛇毒的抗血清IgG分别与其余种蛇毒偶联的亲和介质在水平摇床温和地混匀2小时。随后离心，用离心浓缩管外管收集未结合组分的洗出液，即为该种蛇毒区别于其它5种蛇毒的物种特异性IgG。

(3)蛇毒特异性IgG生物素化。特异性抗体和生物素重量比1∶5混合后，室温震荡结合2小时，随后透析去除未结合生物素，得到生物素化特异性IgG。

(4)检测酶标条制作。以8孔酶标条为载体，配有一个“T”形支架。酶标条上设置6个样品检测孔，1个阳性和1个阴性对照孔。各孔经2％牛血清封闭，漂洗控干后在-20度保存。

(5)蛇伤快速鉴别。检测时，采集蛇伤患者伤口部位流出液，滴加至各检测孔，依次经过生物素化特异性抗体、亲和素化HRP的结合后，加入TMB显色，根据检测孔的阳性或者阴性结果准确判断蛇伤类型。

2.根据权利要求1所述一种蛇伤快速鉴别的方法，其特征在于：所述步骤(4)中的8孔分别包被6种蛇毒特异性抗体混合液(1)、包被液(2)、银环蛇毒特异性IgG(3)、眼镜蛇毒特异性IgG(4)、五步蛇毒特异性IgG(5)、短尾蝮蛇特异性IgG(6)、竹叶青蛇毒特异性抗体(7)和烙铁头蛇毒特异性抗体(8)，每孔抗体量为200ng。

3.根据权利要求1所述一种蛇伤快速鉴别的方法，其特征在于：所述步骤(4)中在酶标孔中包被6种蛇毒特异性抗体混合液为阳性对照(6)，在酶标孔中加入包被液为阴性对照(5)。