[发明专利]α1,2-岩藻糖转移酶基因沉默的体细胞克隆猪及其生产方法与应用无效
| 申请号： | 201210032967.9 | 申请日： | 2012-02-10 |
| 公开（公告）号： | CN102703506A | 公开（公告）日： | 2012-10-03 |
| 发明（设计）人： | 张宇;陈建文;张运海;李运生;章孝荣;韩春杨;章美玲;张远亮;随刘才;周娜汝;陶佳;吴蓉花 | 申请（专利权）人： | 安徽农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N15/873;C12N15/66;A01K67/027 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 230036 *** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 岩藻糖 转移酶 基因 沉默 体细胞 克隆 及其 生产 方法 应用 | ||
【权利要求书】：
1.α2-岩藻糖转移酶基因沉默的体细胞克隆猪，其特征在于，该猪的基因组整合了一段α1，2-岩藻糖转移酶基因的RNAi核苷酸序列，使得该基因在表达过程中发生转录后水平的沉默。
2.根据权利要求1所述猪的生产方法，包括以下步骤：
(1)借助基因工程方法构建猪α1，2-岩藻糖转移酶基因的RNAi慢病毒表达载体pLenti6.3/V5-DEST-EmGFP-FUT1；
(2)通过细胞转染及细胞筛选技术筛选出α1，2-岩藻糖转移酶基因被高效沉默的猪胎儿成纤维细胞系；
(3)利用体细胞核移植技术进行克隆猪的生产。
3.根据权利要求2所述的生产方法，所述步骤(1)的基本过程为：
以猪α1，2-岩藻糖转移酶基因的编码区作为靶位点，设计合成相应的互补的两条miRNA寡核苷酸单链，经退火形成双链后，连接到RNAi表达载体pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR上，并在目的片段上下游分别分别添加酶切位点Asc1和Pme1，然后PCR扩增EmGFP+FUT1片段，约930bp，连接至慢病毒表达载体pLenti6.3/V5-DESTTM，命名为pLenti6.3/V5-DEST-EmGFP-FUT1。
4.α1，2-岩藻糖转移酶基因沉默的体细胞克隆猪在培育抗仔猪腹泻与水肿病猪新品种中的应用。
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