[发明专利]一种吸烟者尿液样品中烟碱及其代谢物的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及吸烟者尿液样品中烟碱及其代谢物的检测方法。该方法采用同位素内标作为标记物，采用GC-MS对吸烟者尿液中烟碱及其代谢物进行检测。

背景技术

烟碱是烟草中的主要生物碱，约占烟草总生物碱量的90％以上。卷烟抽吸时，烟草中的烟碱约有40％直接转移到卷烟主流烟气和侧流烟气中。人体吸入烟气后，烟碱经口腔、喉部、气管以及肺泡的细胞壁进入血液循环系统，再经肝脏代谢，形成多种代谢产物，之后通过尿液、唾液、汗液等分泌物排出体外[Hukkanen J，Jacob P III，Benowitz N L. Metabolism and Disposition Kinetics of Nicotine[J].Pharmacol Rev，2005，57(1)：79-115]。

研究烟碱的体内代谢途径，了解各代谢产物在体内的存在浓度和衰减规律，对明确与吸烟状态相关的生物标记物，建立生物标记物的体内浓度与烟气暴露程度的相关性，有着重要意义。目前，烟碱及其代谢物作为评价暴露烟草烟气程度的生物标记物，受到了生物医学研究、烟草与健康研究的广泛重视[Scherer G.Biomonitoring of inhaled complex mixtures-Ambient air，diesel exhaust and cigarette smoke[J].Exp Toxicol Pathol，2005，57(1)：75-110]，所以需要建立准确检测尿液中烟碱及其代谢物的检测方法。尿液样品由于组成复杂，其中烟碱及其代谢物等目标组分含量较低，选择合适的样品前处理方法和有效的检测方法是保证检测结果准确可靠的重要环节。

烟碱在体内可代谢成多种物质，其中烟碱本身、可替宁和反3′-羟基可替宁、降可替宁都可作为烟气暴露的有效生物标记物，其中可替宁是使用最多的生物标记物，已成为评估吸烟量的特异性生物标记物。但研究表明烟碱及其多个代谢物的总剂量比单个代谢物更能准确表征个体烟气暴露的状态[Boswell C，Curvall M，Elswick R Jr，et al.Modeling nicotine intake in smokers and snuff users using biological fluid nicotine metabolites[J].Biomarkers，2000，5：341-345]。

文献报道有关吸烟者尿液中烟碱及其代谢物的检测方法很多，其中包括巴比妥酸法，免疫法^[89-104]，气液色谱法(GLC)^[105-110]，气相色谱法(GC)^[111-114]或气质联用法(GC-MS)^[115-123]，高效液相色谱法(HPLC)^[124-131]和液相色谱-质谱联用法(LC-MS/MS)^{[80，132-140]}。相比其它方法，LC-MS法虽然检出限低，分离能力强，但是价格昂贵，同时在检测尿液样品时还存在基质效应的干扰[Meger M，Meger-Kossien I，Schuler-Metz A，et al.Simultaneous determination of nicotine and eight nicotine metabolites in urine of smokers using liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J].J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci，2002，778(1-2)：251-261]，所以很多研究者采用GC-MS法检测吸烟者尿液中的烟碱及其代谢物，但这些方法只检测了烟碱在尿液中的1-2种代谢物，前处理方法大多也采用液液萃取，容易出现乳化现象和溶剂浪费[Shin H S，Kim J G，Shin Y J，et al.Sensitive and simple method for the determination of nicotine and cotinine in human urine，plasma and saliva by gas chromatography-mass spectrometry[J].J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci，2002，769(1)：177-183]。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的是提供一种吸烟者尿液复杂基质中烟碱及其代谢物的检测方法。