[发明专利]一种乳腺癌个体化用药检测试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种乳腺癌个体化用药检测试剂盒，包括组分：

(i)HER2即用型抗体，

(ii)PTEN即用型抗体，

(iii)酶标抗体及与酶相应的显色液。

2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述的HER2即用型抗体，为小鼠抗人HER2抗体或者兔抗人HER2抗体。

3.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述PTEN即用型抗体，为小鼠抗人PTEN抗体或者兔抗人PTEN抗体。

4.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述酶标抗体为辣根过氧化物酶或者碱性磷酸酶标记抗小鼠或者抗兔IgG。

5.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述酶标抗体为多聚体辣根过氧化物酶或者多聚体碱性磷酸酶抗小鼠或者抗兔IgG。

6.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述的显色液为适用于辣根过氧化物酶的DAB或者AEC显色液；或者为适用于碱性磷酸酶的BCIP/NBT显色液。

7.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中还包括IHC阳性对照片，所述IHC阳性对照片为经过验证的HER2+/PTEN+乳腺癌病理石蜡切片。

8.一种权利要求1所述的乳腺癌个体化用药检测试剂盒的使用方法，包括三个主要步骤：

(1)石蜡切片的脱蜡和水化；

(2)抗原修复；

(3)免疫组织化学染色；

(4)IHC评估。

9.根据权利要求8所述的使用方法，其特征在于，所述的步骤(2)的抗原修复，具体是将切片置于EDTA抗原修复缓冲液中，水煮加热修复，水沸后95℃-100℃保温20分钟，冷却至室温以下，用PBS冲洗切片。

10.根据权利要求8所述的使用方法，其特征在于，所述步骤(3)的免疫组织化学染色步骤为：将步骤(2)中所得的切片滴加1∶50稀释的HER2即用型抗体，或者滴加1∶50稀释的PTEN即用型抗体，100ul/片，4℃孵育过夜，滴加酶标抗体，孵育后染色，最后脱水透明处理。

11.根据权利要求10所述的使用方法，其特征在于，所述的免疫组织化学染色步骤，具体为：将步骤(2)中所得的切片以H₂O₂阻断内源性过氧化物酶处理，用PBS冲洗后，滴加1∶50稀释的HER2即用型抗体，或者1∶50稀释的PTEN即用型抗体，4℃孵育过夜；PBS冲洗后滴加酶标抗体，室温下孵育后用PBS冲洗甩干，滴加显色液，最后蒸馏水冲洗，苏木精复染，最后脱水透明处理。

12.根据权利要求10或11所述的使用方法，其特征在于，所述的脱水透明处理，具体步骤为：

1.切片置于80％乙醇后快速抽提5-10下，

2.95％乙醇中快速抽提5-10下，

3.无水乙醇中快速抽提5-10下，更换无水乙醇后快速抽提5-10下，

4.二甲苯中快速抽提10-20下，更换二甲苯后抽提10-20下，

5.最后，切片干燥后用中性树胶、盖玻片封固。

13.根据权利要求8所述的使用方法，其特征在于，所述步骤(4)的IHC评估，即HER2和PTEN的表达水平是基于染色强度(SI)和阳性细胞(PP)的百分比来判断，通过半定量的免疫反应性分数(IRS)来确定：计算公式为IRS＝SI×PP，其中SI＝0为阴性、SI＝1为弱阳性、SI＝2为中等阳性、SI＝3为强阳性；PP＝0代表1％阳性细胞、PP＝1代表1％-10％阳性细胞、PP＝2代表11％-50％阳性细胞、PP＝3代表51％-80％阳性细胞、PP＝4代表80％以上阳性细胞，当IRS小于或者等于3代表PTEN丢失；IRS大于或者等于3代表HER2阳性。