[发明专利]一种乳腺癌个体化用药检测试剂盒及其使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及核酸检测方法技术领域，具体而言，本发明涉及检测乳腺癌个体化用药检测试剂盒及其使用方法。

背景技术

乳腺癌是女性最常见、也最具生命威胁的恶性肿瘤之一，我国每年新增乳腺癌患者18万人以上。在所有乳腺癌患者中，约有20-30％的患者会出现HER2(人类表皮生长因子受体2)阳性现象。它的状态预示了患者存活时间较短、患者更容易复发以及治疗效果差等。如不治疗，HER2阳性乳腺癌患者存活时间是1-3年，而HER2阴性的患者至少能存活4-6年。对HER2阳性病人采用赫赛汀单抗药物进行治疗是治疗这类癌症患者的主要手段之一。然而，2008年一项针对5480名肿瘤患者的全国性调查报告显示，中国只有57％的患者进行了HER2的检测，也就是说100个乳腺癌患者中有43人未进行HER2检测，这些患者将丧失最佳治疗时机。由于HER2阳性乳腺癌恶化速度更快，更易复发，为了抓住最佳治疗时机，乳腺癌的患者都应该进行HER2检测；在欧美国家，所有乳腺癌患者确诊都会做HER2检测，以排查恶化速度更快的癌症，这也是国外乳腺癌患者治疗更合理、生存质量更高的重要原因。

但是，HER2阳性病人对主要治疗药物赫赛汀(Herceptin，又名曲妥单抗)的耐药性是导致治疗失败的主要原因，给病患带来了巨大的经济损失和生命代价。在美国，曲妥单抗疗法一个疗程的费用为70,000美元，澳大利亚一个疗程的费用为50,000澳元，在中国一个疗程的花费也多于250,000人民币。最新的临床研究表明，高达74％的HER2阳性患者对赫赛汀存在不同程度的耐药性。由于PTEN基因表达丢失导致的Src激活是耐药性产生的最主要原因。因此，盲目使用赫赛汀不仅有可能给患者带来巨大的经济负担，甚至有可能延误治疗时机，造成生命的损失。

发明内容

本发明所要解决的问题在于提供一种乳腺癌个体化用药检测试剂盒及其使用方法，本发明的试剂盒能够同时检测HER2和PTEN表达，为乳腺癌患者提供个性化治疗的用药原则，极大改善病人的治疗效果。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案为：一种乳腺癌个体化用药检测试剂盒，包括组分：

(i)HER2即用型抗体，

(ii)PTEN即用型抗体，

(iii)酶标抗体及与酶相应的显色液。

优选地，所述HER2即用型抗体，为小鼠抗人HER2抗体或者兔抗人HER2抗体。

优选地，所述PTEN即用型抗体，为小鼠抗人PTEN抗体或者兔抗人PTEN抗体。

优选地，所述酶标抗体为辣根过氧化物酶或者碱性磷酸酶标记抗小鼠或者抗兔IgG。

优选地，所述酶标抗体为多聚体辣根过氧化物酶或者多聚体碱性磷酸酶抗小鼠或者抗兔IgG。

优选地，所述的显色液为适用于辣根过氧化物酶的DAB或者AEC显色液；或者为适用于碱性磷酸酶的BCIP/NBT显色液。

优选地，所述的试剂盒中还包括IHC阳性对照片，所述IHC阳性对照片为经过验证的HER2+/PTEN+乳腺癌病理石蜡切片。

本发明所要解决的又一技术问题在于提供一种乳腺癌个体化用药检测试剂盒的使用方法。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案为：一种乳腺癌个体化用药检测试剂盒的使用方法，包括三个主要步骤：

(1)石蜡切片的脱蜡和水化；

(2)抗原修复；

(3)免疫组织化学染色；

(4)IHC评估。

优选地，所述的抗原修复，具体是将切片置于EDTA抗原修复缓冲液中，水煮加热修复，水沸后95℃-100℃保温20分钟，冷却至室温以下，用PBS冲洗切片。

优选地，所述的免疫组织化学染色步骤为，将步骤(2)中所得的切片滴加1∶50稀释的HER2即用型抗体，或者滴加1∶50稀释的PTEN即用型抗体，100ul/片，4℃孵育过夜，滴加酶标抗体，孵育后染色，最后脱水透明处理。

优选地，所述的免疫组织化学染色步骤，具体为：将步骤(2)中所得的切片以H₂O₂阻断内源性过氧化物酶处理，用PBS冲洗后，滴加1∶50稀释的HER2即用型抗体，或者1∶50稀释的PTEN即用型抗体，4℃孵育过夜；PBS冲洗后滴加酶标抗体，室温下孵育后用PBS冲洗甩干，滴加显色液，最后蒸馏水冲洗，苏木精复染，最后脱水透明处理。

优选地，所述的脱水透明处理，具体步骤为：

1.切片置于80％乙醇后快速抽提5-10下，