[发明专利]一种多孢灵芝的选育方法

权利要求书

1.一种多孢灵芝的选育方法，其特征在于：该方法采用常规选育即灵芝组织分离法，辅以现代生物技术中的孢子诱变育种，进行多孢灵芝遗传选育技术研究，主要包括如下5个步骤：

1)亲本选择

从全国各地采集品质优良、产孢量较高的灵芝品种作为多孢灵芝的培育亲本；

2)常规选育

将步骤1)培育亲本通过灵芝组织分离法分离培养获得纯菌丝体，经过栽培试验，筛选获得产孢量较高的灵芝品种——灵芝组织分的法采用灵芝的幼或菌幼组织分离培养，获得纯菌丝的方法：

3)诱变处理

将步骤2)得到的灵芝品种孢子制成孢子悬浮液，通过紫外线诱变处理，用无菌水将紫外线照射后的孢子悬浮液稀释，再取稀释液涂布于马铃薯琼脂培养基的培养皿上，在25℃下培养5～10d，在平板上得到单菌落，选纯正、健壮的单个菌落移入斜面试管内，一个菌落只接一支斜面，待斜面菌丝长好后，再分别接入2～4瓶原种中，然后进行栽培试验，反复比较各菌落的生物学特性，择优留取；

4)品种筛选

通过步骤2)和3)，选育-诱变-再选育-再诱变，筛选出符合主要生产性状要求的产孢量高的菌株，从而减少常规育种时间，实现多孢灵芝品种遗传选育工作的快速高效；

5)人工栽培

将通过步骤4)得到的优良品种，进行人工栽培，实现多孢灵芝的速生丰产，其产孢量达8～16％；品种遗传及主要产孢量性状稳定，同时缩短了多孢灵芝育种时间。

2.根据权利要求1所述一种多孢灵芝的选育方法，其特征在于：

步骤2)灵芝组织分离法具体操作包括：A.幼蕾分离：切取灵芝菌柄先端膨大的幼蕾，在无菌条件下，用75％酒精棉球擦拭，再用灼烧后的刀片从柄部浅切1刀，掰开两半后用锋利的接种刀挑切取幼蕾内菌肉1小块，移接至斜面中央，28℃下遮光培养，菌丝长满斜面即为母种；B.菌盖分离：选取生长正常、健壮和未成熟的子实体，切去菌柄，用75％酒精棉球擦拭菌盖正反面，然后在菌盖边缘黄色生长圈处，切破皮壳，掰下幼嫩菌盖1块，用灼烧后的解剖刀将断面菌肉纵横切割成米粒大小的组织粒，再用接种针将组织粒移接至斜面上，28℃下遮光培养，整个操作需在严格无菌条件下进行。

步骤3)诱变处理具体操作包括：A.新鲜灵芝无菌孢子的收集：将灭菌处理过的多套培养皿、玻璃漏斗及不锈钢挂钩，置于超净工作台上；选择正在弹射孢子的灵芝子实体菌盖用75％酒精棉球擦拭，在无菌操作状态下将其挂于玻璃漏斗内，灵芝子实体经过12～20h自然弹射后，培养皿中可收集得到一定数量的新鲜灵芝无菌孢子；B.孢子悬浮液的制备：将新鲜的灵芝无菌孢子移入无菌生理盐水或磷酸缓冲液中，摇匀后即成孢子悬浮液；C.诱变处理：用紫外线处理，诱变处理应在暗箱内进行，箱内装15w紫外灯1支，悬挂于30cm高处，诱变处理时应先开灯20min，使波长稳定，然后将孢子悬浮液倒入直径为6cm的无菌培养皿中，打开皿盖，照射时间1～3min，用无菌水将照射后的孢子悬浮液稀释1000倍以上，然后取稀释液0.2ml涂布于马铃薯琼脂培养基的培养皿上，在25℃下培养5～10d，选纯正、健壮的单个菌落移入斜面试管内，供进一步筛选；D.挑菌筛选：将诱变后的孢子经培养长出菌落后及时挑菌，选发育健全的单个菌落移入斜面试管内，一个菌落只接一支斜面，待斜面菌丝长好后，再分别接入2～4瓶原种中，然后进行栽培试验，反复比较各菌落的生物学特性，择优留取。