[发明专利]一种HBD3气管上皮特异性表达载体及其构建的重组细胞

权利要求书

1.一种HBD3气管上皮特异性表达载体，其特征在于，包含目的基因HBD3，在HBD3基因的上游连接有SEQ.ID.NO.1所示的MUC1启动子序列。

2.如权利要求1所述的HBD3气管上皮特异性表达载体，其特征在于，所述的HBD3基因的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.2所示；

还在MUC1启动子序列的上游设有标记基因EGFP，EGFP基因的上游设有CMV启动子。

3.如权利要求1所述的HBD3气管上皮特异性表达载体，其特征在于，所述的HBD3气管上皮特异性表达载体，还在目的基因HBD3的下游设有抗生素筛选基因neo基因。

4.如权利要求3所述的HBD3气管上皮特异性表达载体，其特征在于，所述的neo基因的两侧还设有同向的Loxp序列。

5.如权利要求1所述的HBD3气管上皮特异性表达载体，其特征在于，所述的HBD3气管上皮特异性表达载体，包括有以下元件：CMV-EGFP-MUC1-HBD3-Loxp-neo-Loxp。

6.如权利要求1所述的HBD3气管上皮特异性表达载体，其特征在于，所述的HBD3气管上皮特异性表达载体为Muc1-loxp-EGFP-HBD3表达载体，所述的Muc1-loxp-EGFP-HBD3表达载体，先通过Sal I和Sac II多克隆位点将HBD3基因克隆到loxp-EGFP-C1载体上，然后再通过BspEI和HindIII多克隆位点将Muc1启动子克隆到Loxp-EGFP-HBD3载体上而得到。

7.一种基于HBD3气管上皮特异性表达载体构建的重组细胞，其特征在于，其宿主细胞为牛胎儿成纤维细胞，通过转染Muc1-loxp-EGFP-HBD3外源性表达载体，将目的基因HBD3整合到牛胎儿成纤维细胞的基因组。

8.如权利要求7所述的基于HBD3气管上皮特异性表达载体构建的重组细胞，其特征在于，所述的宿主细胞为3～10代的牛胎儿成纤维细胞。

9.如权利要求7所述的基于HBD3气管上皮特异性表达载体构建的重组细胞，所述的牛胎儿成纤维细胞通过电转染法转染线性化的外源性表达载体Muc1-loxp-EGFP-HBD3。

10.权利要求7所述的基于HBD3气管上皮特异性表达载体构建的重组细胞作为核移植构建转基因克隆胚的核供体细胞的应用。