[发明专利]一种HBD3气管上皮特异性表达载体及其构建的重组细胞

说明书

技术领域

本发明属于转基因克隆动物技术领域，涉及转基因克隆胚的核供体细胞的构建，特别涉及一种HBD3气管上皮特异性表达载体及其构建的重组细胞。

背景技术

结核分支杆菌是人畜共患的结核病的致病菌，结核分枝杆菌分为人型、牛型和禽型三种类型，三者存在交叉感染现象。而其中牛的结核分支杆菌能够通过感染的牛奶和空气传播感染人和牛，牛型结核分枝杆菌主要侵害牛，牛结核病是由牛分枝杆菌所引起的一种人畜共患的慢性传染病，其病变特征为病牛逐渐消瘦，在组织器官中形成结节性肉芽肿和干酪样坏死。目前，控制牛结核的唯一方法是通过“检疫-扑杀”措施淘汰阳性牛，但是这一方法对对农业生产和人的生命安全造成了很大的影响。

结核病的传统的诊断方法有细菌学诊断和血清学诊断(包括一些分子生物学的方法)。准确而及时的诊断方法对该病的控制极为重要，牛型结核菌素皮内变态反应(Tuberculin skin test TST)是国际卫生组织唯一推荐的检测方法，但该方法存在非特异性反应和因细胞免疫水平下降引起的假阴性反应等不足，使得结核菌素皮内变态反应的准确性受到质疑。此外对于结核病的预防，人的结核病在预防时可以使用卡介苗和结核DNA疫苗等；但是对于牛结核病的疫苗还没有商品化使用，因此不能通过免疫来预防。同时牛结核病的治疗只能采用抗生素治疗，如链霉素、卡那霉素等。但是，长期使用抗生素不但会使细菌产生抗药性，还存在牛奶中药物残留的问题，所以寻求一种新的治疗结核病的方法迫在眉睫。

近几年，分子生物学和分子遗传学及基因工程技术的发展与完善为动物抗病育种提供了新的思路，Dolly羊的诞生，从而使体细胞转基因结合克隆技术培育优良动物品种成为基因工程的焦点。

体细胞克隆技术生产转基因动物已表现出强大的生命力(GOO J，et al.An approach for producing transgenic cloned cows by nuclear transfer of cells transfected with human alpha 1-antitrypsin gene[J].Theriogenology，2006，65(9)：1800-1812.)，该技术的优点是基因转移在体细胞培养阶段进行，直接利用已确定的整合有目的基因的体细胞为核供体进行体细胞核移植(SCNT)，这样体细胞核移植前供体细胞的选择不但可以提高转基因动物的出生率还可以降低其生产成本(WHEELER MB，WALTERS EM.Transgenic technology and applications in swine[J].Theriogenology，2001，56：1345-69.)。2006年，美国科学家Maga等培育出在乳腺中特异表达人溶菌酶的转基因山羊(Maga E A etal Consumption of milk from transgenic goat expression human lysozyme in the mammary gland result in modulation of intestinal microfluro[J].Transgenic Ras，2006，15：515-519)。2009年，西北农林科技大学生物工程研究所培育出在乳腺中特异表达人防御素的转基因奶牛。现在对于体细胞转基因和克隆技术掌握的比较成熟。