[发明专利]一种饮用水消毒副产物对细胞毒性的测定方法

权利要求书

1.一种饮用水中消毒副产物细胞毒性的测定方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)首先将处于对数生长期的细胞放入新鲜培养液中培养；

(2)铺板：将步骤(1)中含有细胞的培养液接种于细胞培养板中，培养过夜，待细胞贴壁；

(3)(3a)用助溶剂溶解饮用水消毒副产物，配制饮用水消毒副产物储备液；

(3b)并将配置好的饮用水消毒副产物储备液与不含细胞的新鲜培养液混合；

(3c)然后，将步骤(2)中含贴壁细胞的培养液中的培养液移除，在细胞中加入步骤(3b)制得的含有饮用水消毒副产物储备液的新鲜培养液，培养一段时间；

(4)移去步骤(3c)中含有饮用水消毒副产物的培养液，用磷酸缓冲液冲洗细胞1～3次，再加入含有噻唑蓝的无血清培养液，培养，直至产生蓝紫色结晶甲瓒；

(5)取出细胞培养板，用离心机离心沉淀甲瓒，移去上清液，并加入二甲基亚砜150～200μL/孔，在摇床上震荡10～15min，使甲瓒沉淀完全溶解，测定溶液吸光度。

2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：所述的饮用水中消毒副产物指有机类饮用水消毒副产物，包括卤代乙酸、卤代甲烷、卤代乙腈、卤代乙酰胺或卤代硝基甲烷中的一种或一种以上；

所述的细胞为小鼠肾细胞。

3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：所述的步骤(1)中细胞培养条件为37℃，CO₂培养箱中，避光培养；

或所述的新鲜培养液是95％DMEM高糖培养液与5％血清的混合溶液，以体积比计。

4.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：所述的步骤(2)中的细胞培养板为96孔细胞培养板，步骤(2)中培养液在96孔板中的铺板样式为：96孔板外围一圈加入100～200μL磷酸缓冲液，中部60个孔共分为10列，第一列设置调零对照组，第二列设置溶剂对照组，其余8列每列设置一个饮用水中消毒副产物浓度梯度，每个浓度梯度6个平行复孔。

5.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：所述的步骤(2)中细胞悬浮液浓度为4×10⁴～6×10⁴个/mL，所述的细胞培养板中每孔悬浮细胞的加入量为180～220μL，所述的每孔所含细胞量为0.72×10⁴～1.32×10⁴个。

6.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：所述的步骤(3)中的助溶剂为DMSO。

7.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：所述的步骤(3a)中饮用水消毒副产物储备液，浓度在10²～10⁶mg/L之间。

8.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：所述的步骤(3b)中饮用水中消毒副产物储备液与新鲜培养液的体积混合比为1∶999～1∶99，优选1∶99；

或所述的步骤(3c)每孔混合液加入量为100μL，培养时间为72小时。

9.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：所述的步骤(4)中含噻唑蓝的无血清培养液是浓度为5mg/mL的噻唑蓝溶液与不含血清的新鲜培养液的混合物，体积比为1∶10；

或所述的步骤(4)中含噻唑蓝的无血清培养液的加入量为110μL；

或所述的磷酸缓冲液的pH为7.2～7.5。

10.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：所述的步骤(5)中离心条件为800-1200r/min，离心时间为5-7min；

或所述的步骤(5)中测定溶液吸光度的仪器为酶标仪，酶标仪测定条件为：主波长490nm，副波长630nm；

或所述的用于铺板、换液或加液的移液工具为移液枪，优选排枪。