[发明专利]干扰素α突变体及其聚乙二醇衍生物

说明书

技术领域

本发明一般的涉及干扰素α突变体、其聚乙二醇衍生物，后者的制备方法、药物组合物和两者在制备治疗病毒性疾病的药物中的用途，特别的涉及复合干扰素半胱氨酸突变体、其聚乙二醇衍生物，后者的制备方法、药物组合物和两者在制备治疗病毒性疾病的药物中的用途。

背景技术

干扰素(interferon，IFN)是一种最初由动物机体产生的具有广谱抗病毒作用的细胞因子类药物，根据其产生部位与作用机理不同可以分为α、β、γ、λ等大的类型，而每种大的类型又可分为若干小的亚型，同一大的类型中不同的亚型间在一级结构上差异很小，在二级以上高级结构上非常接近。在几种大的类型中，α型是应用最广的一种，目前临床应用的此型干扰素主要包括干扰素α2a、干扰素α2b、干扰素α1b、复合干扰素等。其中复合干扰素(consensus interferon或integrated interferon)是在对已知的α型干扰素进行序列比对后，把出现频率最高的氨基酸分配到各自相应的位置，并对个别位置进行修改后得到的非天然氨基酸序列的人工设计α型干扰素，包括多种氨基酸序列的分子，但彼此间同源性高，它们的生物学活性为天然α型干扰素的10倍以上。

虽然各种α型干扰素在当前治疗病毒性感染疾病的过程中发挥着越来越广泛的疗效，但是其自身稳定性差、半衰期短的特点也限制了其进一步的临床推广应用，给病人用药带来了一些麻烦。鉴于此原因，国内外开展了很多长效干扰素方面的基础研究与产品开发，包括对干扰素分子自身进行改造、研发包括干扰素分子氨基酸序列的融合蛋白、对干扰素分子进行化学修饰、选择适宜的药物输送体系优化干扰素分子的体内输送与药效发挥过程等，其中聚乙二醇修饰干扰素(属于化学修饰的干扰素)的上市是在这一领域取得的最大成功。

聚乙二醇(polyethelene glycol，PEG)是一种线性高分子化合物，由于其良好的生物相容性和既亲水又亲酯的双亲特性，得以从众多的化学修饰剂中脱颖而出成为目前研究与应用最广的蛋白多肽类药物的修饰剂。经过多年的研究开发，目前已有两个PEG修饰的干扰素α产品成功上市，分别是美国先灵葆雅(Schering-Plough)公司(现已被默沙东公司收购)的PEG修饰的干扰素α2b(商品名为“佩乐能”)和瑞士罗氏(Roche)公司的PEG修饰的干扰素α2a(商品名为“派罗欣”)，分别于2001年和2002年在美国上市，在2003年同时进入中国内地销售。关于先灵葆雅公司的PEG修饰的干扰素α2b，在中国专利申请CN00808452.1中对其配方组成有所描述；而罗氏公司的PEG修饰的干扰素α2a则在中国专利CN97113049.3中有详细描述。除此之外，还有更多的PEG修饰的干扰素α产品正在研究开发中，其中最接近上市阶段的是Intermune公司开发的PEG修饰的复合干扰素。

纵观PEG修饰干扰素α技术的发展，主要是伴随着PEG修饰技术的发展。早期的研究和开发主要围绕非特异性位点PEG修饰技术，所选用的PEG修饰剂纯度低、分子量小(一般在10KDa以下)且分布范围宽、修饰位点种类和数量多且形成的修饰衍生物不稳定，造成修饰产物组成不均一、纯度相对较低(85％左右)、质量控制不易实现、长效作用不明显且仍有一定的毒副作用。上述先灵葆雅公司的PEG修饰的干扰素α2b产品就属于此类型。伴随着PEG修饰剂的发展出现了特异性位点PEG修饰技术，由于所选用的PEG修饰剂的纯度得到了很大提高，分子量可达20KDa以上且分布范围大幅缩窄，且修饰机理的改善使修饰位点种类和数量减少，形成的修饰衍生物稳定性提高，从而使上述非特异性位点PEG修饰技术的缺点得到了很大程度的改善。

特异性位点PEG修饰技术又可分为三种类型，一种是用具有分支结构的PEG修饰剂修饰目标蛋白分子，借助分支结构PEG修饰剂较强的空间位阻效应达到减少修饰位点数量的目的。上述罗氏公司的PEG修饰的干扰素α2a产品就属于此类型。但是由于这种所谓的“特异性位点”修饰技术从修饰机理上既不能做到只修饰单一种类的氨基酸，也不能做到只修饰单一位点的氨基酸，所以修饰位点的种类与数目依然众多，如中国专利CN200380103341.1公开了分支结构PEG修饰的干扰素α2a(包括罗氏公司的PEG修饰干扰素α2a产品“派罗欣”)具有12个修饰位点的异构体。