[发明专利]巫山淫羊藿的组培快繁方法和繁育的巫山淫羊藿

权利要求书

1.巫山淫羊藿的组培快繁方法，包括以下步骤：

A.外植体层积处理：将巫山淫羊藿种子消毒后于0～10℃低温沙藏层积处理；

B.外植体消毒：将层积处理后的种子进行消毒处理，再用无菌镊子将种胚剥出，备用；

C.初代诱导：将消毒后的种胚接种于诱导培养基中培养，使种胚诱导愈伤组织而分化出不定芽，或者使种胚直接诱导出芽；

D.继代增殖：将步骤C中所得芽转入增殖培养基中，生成组培丛芽；

E.再生植株诱导生根：将步骤D诱导分化的1～4cm长的健康的芽丛长成的小植株转入生根培养基中，培养以形成白色须根，进而形成完整植株。

2.根据权利要求1的方法，其中步骤A中，所述消毒是如下方式处理：流水冲洗15-30min，于45-75％酒精中浸泡30s，再在0.1％-0.5％HgCl₂中浸泡2-8min，无菌水冲洗2-6次。

3.根据权利要求1的方法，其中步骤A中，所述低温沙藏层积处理是如下方式处理：使种子与河沙按1∶2～5的比例混合，保持含水量50～70％，经3～8℃低温沙藏层积处理75～120天。

4.根据权利要求1的方法，其中步骤B中，所述消毒是先用酒精消毒，接着用HgCl₂消毒。

5.根据权利要求1的方法，其特征在于：

步骤C中，所述诱导培养基是包含MS+2，4-D 2mg/L+IBA 2mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+0.6％琼脂的培养基，或者是包含MS+6-BA 1mg/L+NAA 0.5mg/L+IBA 1mg/L+蔗糖30g/L+0.6％琼脂的培养基，或者是包含MS+IBA 2mg/L+6-BA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+0.6％琼脂的培养基；

步骤D中，所述增殖培养基是包含MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+0.6％琼脂的培养基；和/或

步骤E中，所述生根培养基是包含1/2MS+0.1NAAmg/L的培养基。

6.根据权利要求1的方法，其中步骤C中，初代诱导是如下处理的：将消毒后的种胚接种于包含MS+2，4-D 2mg/L+IBA 2mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+0.6％琼脂的诱导培养基中培养，产生愈伤组织，接着在包含MS+6-BA 1mg/L+NAA 0.5mg/L+IBA1mg/L+蔗糖30g/L+0.6％琼脂的诱导培养基中培养，分化出不定芽；或者，将消毒后的种胚接种于包含MS+IBA 2mg/L+6-BA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+0.6％琼脂的诱导培养基中培养，直接诱导出芽。

7.根据权利要求1至6任一项所述的方法，其包括以下步骤：

A.外植体层积处理：将巫山淫羊藿种子，流水冲洗，消毒后于0～10℃低温沙藏层积处理；

B.外植体消毒：将层积处理后的种子，先用酒精浸泡，再用升汞浸泡，无菌水冲洗干净，用无菌镊子将种胚剥出，备用；

C.初代诱导：将消毒后的种胚接种于包含MS+2，4-D 2mg/L+IBA 2mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖30g/L+0.6％琼脂的诱导培养基中培养，产生愈伤组织，接着在包含MS+6-BA 1mg/L+NAA 0.5mg/L+IBA 1mg/L+蔗糖30g/L+0.6％琼脂的诱导培养基中培养，分化出不定芽；或者，将消毒后的种胚接种于包含MS+IBA 2mg/L+6-BA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+0.6％琼脂的诱导培养基中培养，直接诱导出芽；

D.继代增殖：将步骤C中所得芽转入包含MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+0.6％琼脂的增殖培养基中，生成组培丛芽；

E.再生植株诱导生根：将诱导分化的1～4cm长的健康的芽丛长成的小植株转入生根培养基中，1个月后形成白色须根，进而形成完整植株。

8.一种巫山淫羊藿株植，其是由权利要求1至7任一项所述的方法繁殖得到的。

9.一种巫山淫羊藿的芽，其是由权利要求1至7任一项所述的方法繁殖得到的。

10.一种巫山淫羊藿的愈伤组织，其是由权利要求1至7任一项所述的方法繁殖得到的。