[发明专利]巫山淫羊藿的组培快繁方法和繁育的巫山淫羊藿

说明书

技术领域

本发明属中药材栽培技术领域，涉及巫山淫羊藿繁育方法，特别涉及巫山淫羊藿的组培快繁方法。

背景技术

巫山淫羊藿Epimedium wushanense T.S.Ying为小檗科淫羊藿属多年生宿根性草本药用植物，为《中华人民共和国药典》2010年版一部所载品种。以其干燥的叶入药，有补肾阳，强筋骨，祛风湿的功效，且具有改善心血管系统，调节内分泌和抗骨质疏松等生理活性。巫山淫羊藿药材原料主要依靠野生资源，随着国内外对其需求量的不断增大，巫山淫羊藿野生资源遭到严重破坏，不能满足国内外市场的需求。目前淫羊藿的繁殖方式主要有：通过地下根茎的无性繁殖及种子繁殖(有性繁殖)，淫羊藿种子存在明显的休眠现象，繁殖发芽率低，且生长缓慢，生产上大多采用分株繁殖。

人们期待有一种能够以低成本、高繁殖率、和/或繁殖周期短的方法来繁育和栽培巫山淫羊藿，以满足越来越大的巫山淫羊藿药用需求，并保护野生药用资源。

发明内容

本发明的目的是提供一种能够以低成本、高繁殖率、和/或繁殖周期短的方法来繁育和栽培巫山淫羊藿。本发明人发现以巫山淫羊藿种子为繁育材料，使用特定的培养条件，可以有利地实现上述有关巫山淫羊藿繁育中的一个或多个方面的要求。本发明基于此发现而得以完成。

为此，本发明第一方面涉及一种巫山淫羊藿的组培快繁方法，包括以下步骤：

A.外植体层积处理：将巫山淫羊藿种子消毒后于0～10℃低温沙藏层积处理；

B.外植体消毒：将层积处理后的种子进行消毒处理，再用无菌镊子将种胚剥出，备用；

C.初代诱导：将消毒后的种胚接种于诱导培养基中培养，使种胚诱导愈伤组织而分化出不定芽，或者使种胚直接诱导出芽；

D.继代增殖：将步骤C中所得芽转入增殖培养基中，生成组培丛芽；

E.再生植株诱导生根：将步骤D诱导分化的1～4cm长的健康的芽丛长成的小植株转入生根培养基中，培养以形成白色须根，进而形成完整植株。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤A中，所述消毒是如下方式处理：将种子用流水冲洗，于酒精中浸泡，再在HgCl₂中浸泡，再用无菌水冲洗。在一个实施方案中，步骤A中，所述消毒是如下方式处理：流水冲洗15-30min(例如约30min)，于45-75％(例如约75％)酒精中浸泡10-60s(例如约30s)，再在0.1-0.5％(例如约0.5％)的HgCl₂中浸泡2-8min(例如约6min)，无菌水冲洗2-6次(例如约5次)。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤A中，所述低温沙藏层积处理是如下方式处理：使种子与河沙按1∶2～5的比例混合，保持含水量50～70％，经3～8℃低温沙藏层积处理75～120天。由此处理的种子可以打破种子的休眠。在一个实施方案中，所述河沙是经高温灭菌1-5h(例如约2h)后再冷却至室温的河沙。在一个实施方案中，所述种子与河沙按1∶(1-5)，例如约1∶3的比例混合。在一个实施方案中，所述种子与河沙按1∶3的比例混合，保持含水量40-70％(例如约60％)。在一个实施方案中，所述种子与河沙按1∶3的比例混合，保持含水量60％，经2-5℃低温沙藏层积处理60-100天(例如约90天)。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤B中，所述消毒是先用酒精消毒，接着用HgCl₂消毒。在一个实施方案中，步骤B中，将层积处理结束后的种子洗去河沙，于45-75％(例如约75％)酒精中浸泡10-60s(例如约30s)，无菌水冲洗2-6次(例如约5次)，再用0.1-0.5％(例如约0.5％)的HgCl₂消毒2-8min(例如约6min)，无菌水冲洗2-6次(例如约5次)。在一个实施方案中，步骤B中，用灼烧冷却后的镊子和解剖刀将种胚轻轻剥出，无菌滤纸吸干水分后，备用于下一处理步骤。