[发明专利]一种空肠弯曲菌的高灵敏快速检测试剂盒

权利要求书

1.一种空肠弯曲菌的高灵敏快速检测试剂盒，其特征在于包括检测靶点为空肠弯曲菌高度保守的鞭毛合成相关基因flhA，其核苷酸序列GeneBank基因登录号为905174；四条可环介导等温扩增靶序列的特异性引物、2条内引物flhA-FIP、flhA-BIP和2条外引物flhA-F3、flhA-B3，引物序列如下：

flhA-FIP 5′-ACCCTTGTACTACCTTTTGTTACAA-GTGGAAATATGGTCA-3′

flhA-BIP 5′-ACAAGCAAGATTTACACTTGATGC-GTCCTGCATTTAAATCCG-3′

flhA-F35′-GCATTTGGAGAATTTGTTGTTG-3′

flhA-B35′-TTGACGTCTTGCTCTAGC-3′。

2.应用权利要求1所述的试剂盒检测空肠弯曲菌的方法为：

(1)提取细菌基因组DNA；

(2)混合环介导等温扩增反应体系：在无菌的微量离心管中加入2.5uL 10×buffer、2uL 10umol/L flhA-FIP、2uL 10umol/L flhA-BIP、0.5uL5umol/L flhA-F3、0.5uL5umol/L flhA-B3、4uL10mmol/LdNTPs、1uLDNA模板、11.5uL的ddH2O；

(3)加热变性：将上述混合体系置95℃水浴5min，迅速插入冰中30秒；

(4)在混合体系中加入1uL8UBstDNA polymerase large fragment，完全混合。

(5)环介导等温扩增：将反应混合物置63℃水浴中60分钟，然后80℃水浴放置20分钟终止环介导等温扩增反应。

(6)电泳分析环介导等温扩增结果：取4uL扩增反应混合物，用2.0％琼脂糖凝胶电泳分析，紫外光下观察电泳结果。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述环介导等温扩增反应体系为：