[发明专利]一种检测水产品中4-己基间苯二酚残留量的试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及化学物质的理化分析领域，具体涉及一种检测水产品中4-己基间苯二酚残留量的试剂盒及其检测方法。

背景技术

4-己基间苯二酚(4-Hexylresorcinol，4-HR)，别名2，4-二羟基己基苯、己雷锁辛、4-HR，CAS号位133-77-6，4-己基间苯二酚药物结构式如下所示：

4-己基间苯二酚为白色或黄白色针状结晶，有弱臭，强涩味；遇光、空气变淡棕或粉红色，微溶于水、乙醇、甲醇、甘油、醚、氯仿、苯和植物油中。4-己基间苯二酚是一种能抑制褐变的新型抗氧护色剂。用于保持虾、蟹等甲壳水产品在贮存过程中色泽良好不变黑(虾类黑变主要是机体存在的多酚氧化酶催化反应所致)。实验表明4-己基间苯二酚可通过抑制多分氧化酶活性控制褐变延长贮存期。

我国GB 2760-2007《食品添加剂使用卫生标准》规定，4-己基间苯二酚的使用限量，可按生产需要适量用于防止虾类褐变，但其最大残留限量MRL(maximum required limits)值应小于1mg/kg。欧盟95/2/EC指令中规定在甲壳类中作为抗氧化剂使用，其MRL为2mg/kg。联合国FAO/WHO所属JECFA于1995年第44次会议上，4-己基间苯二酚被批准使用，其规定对甲壳类处理浓度可达50mg/L，食用部分的MRL为1mg/kg。

目前4-己基间苯二酚残留的检测方法主要有液相色谱法。但存在很多不足之处：比如：4-己基间苯二酚易溶于乙醇、甲醇、甘油、醚、氯仿、苯和植物油中，采用甲醇、乙醇提取的杂质太多，特别是极性强的杂质；选用甲醇作为提取溶剂后需经C₁₈柱净化；因此，为得到较好的回收率，需要选择合适的提取溶剂。同时也需要选择合适的净化溶剂以达到理想的净化效果。

为满足国内外对水产品中4-己基间苯二酚残留量测定的需求，需要对上述样品前处理条件和色谱分析条件进行优化，建立一种高选择性、高灵敏度测定水产品中4-己基间苯二酚残留量的液相色谱-荧光方法。

发明内容

本发明的目的是针对上述现有技术的缺陷，提供一种检测水产品中4-己基间苯二酚残留量的试剂盒，可达到高选择性、高灵敏度的效果，广泛应用于虾、鱼和蟹等进出口水产品中4-己基间苯二酚残留量的测定。

为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：

本发明的一种检测水产品中4-己基间苯二酚残留量的试剂盒，包括样品提取溶剂和净化溶剂，所述提取溶剂为乙酸乙酯，所述净化溶剂为甲醇-乙腈-水溶液和乙腈饱和正己烷溶液。

优选的，所述甲醇-乙腈-水溶液中的甲醇、乙腈、水的体积比为1∶2∶1。

所述甲醇-乙腈-水溶液与所述乙腈饱和正己烷溶液的使用体积比为1∶1。

本发明还提供了一种利用本发明的试剂盒对水产品中4-己基间苯二酚残留量进行检测的方法，具体步骤按如下进行：

(1)样品提取：称取样品于离心管中，加入提取溶剂乙酸乙酯和无水硫酸钠，匀质，离心，上清液过无水硫酸钠转移到浓缩瓶中，另取一支离心管，加入提取溶剂乙酸乙酯15mL洗涤匀质器刀头，洗涤液移入第一支离心管中，于涡旋振荡器振荡提取，离心，合并洗涤液于100mL浓缩瓶中，38℃旋转蒸发浓缩至干，所述样品：提取溶剂：无水硫酸钠的质量体积质量比为1∶10∶1.5；

(2)净化：步骤(1)中的残渣加入净化溶剂甲醇-乙腈-水溶液溶解，所述甲醇-乙腈-水溶液中各组分体积比为1∶2∶1，超声波水浴，涡旋振荡，加入净化溶剂乙腈饱和正己烷脱脂，涡旋，转移入离心管中，离心，弃正己烷层，重复操作一次，下层过滤膜，供高效液相色谱测定，所述净化溶剂中甲醇-乙腈-水溶液、乙腈饱和正己烷的质量体积比为1∶1；

(3)液相色谱测定：色谱条件如下：

a)色谱柱：Agilent TC C₁₈ 250mm×4.6mm(i.d.)，5μm，或相当者；

b)流动相：乙腈-水溶液(75+25，V/V)；

c)流速：1.0mL/min；

d)检测波长：激发波长276nm；发射波长307nm；

e)柱温：30℃；

f)进样量：10μL；

(4)结果计算。

优选的，所述步骤(1)中的匀质时间为30s，离心条件为4000r/min，离心3min。

优选的，所述步骤(2)中的水浴时间为10s，涡旋30s，滤膜为0.20μm的滤膜。