[发明专利]一种捕获探针的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种捕获探针的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

A.根据待捕获核酸片段的核酸序列信息，得到至少一个带有插入片段的DNA克隆载体；

B.以DNA克隆载体为原料，利用生物素标记数量和位置确定的扩增引物或接头元件制备捕获探针。

2.根据权利要求1所述的捕获探针的制备方法，其特征在于，所述步骤B利用生物素标记数量和位置确定的扩增引物制备捕获探针，包括以下步骤：

B1.片段化处理DNA克隆载体，得到DNA克隆载体片段；

B2.在DNA克隆载体片段两端接上接头，得到带接头的DNA克隆载体片段；

B3.利用生物素标记数量和位置确定的扩增引物对带接头的DNA克隆载体片段进行扩增，得到扩增产物；

B4.分离提纯扩增产物，得到生物素标记数量和位置确定的捕获探针。

3.根据权利要求1所述的捕获探针的制备方法，其特征在于，所述步骤B利用生物素化标记数量和位置确定的接头元件制备捕获探针，包括以下步骤：

B1’.通过DNA克隆载体培养增殖，得到DNA克隆载体群；

B2’.片段化处理DNA克隆载体群，得到DNA克隆载体片段；

B3’.在DNA克隆载体片段两端接上生物素标记数量和位置确定的接头元件，得到带生物素标记接头的DNA克隆载体片段；

B4’.分离提纯带生物素标记接头的DNA克隆载体片段，得到生物素标记数量和位置确定的捕获探针。

4.根据权利要求2或3所述的捕获探针的制备方法，其特征在于，所述DNA克隆载体片段的大小在100-1000bp之间。

5.根据权利要求2或3所述的捕获探针的制备方法，其特征在于，所述分离提纯扩增产物或分离提纯带生物素标记接头的DNA克隆载体片段，是通过表面带有链霉亲和素或亲和素修饰的微珠实现的。

6.根据权利要求1所述的捕获探针的制备方法，其特征在于，若所述步骤A中的DNA克隆载体数量大于等于2时，则插入片段相互之间叠加能形成完整的待捕获核酸片段。

7.一种基于权利要求1所述方法制备的捕获探针进行核酸片段捕获的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

M1.片段化处理源核酸得到源核酸片段库；

M2.利用基于权利要求1所述方法制备的捕获探针与源核酸片段库混合杂交，捕获目标核酸片段。

8.根据权利要求7所述的核酸片段捕获的方法，其特征在于，所述步骤M1中源核酸片段大小在100-1000bp之间。

9.根据权利要求7所述的核酸片段捕获的方法，其特征在于，所述步骤M1还包括对得到的源核酸片段库进行扩增的步骤。

10.根据权利要求7所述的核酸片段捕获的方法，其特征在于，所述步骤M2之后还包括以下步骤：

M3.变性解离捕获的目标核酸片段的片段，形成片段文库。

11.一种基于权利要求7所述的方法捕获的核酸片段进行基因测序的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

P1.利用基于权利要求6所述方法所捕获的核酸片段形成的片段文库中加入引物进行扩增，得到捕获片段扩增产物；

P2.分离提纯捕获片段扩增产物，形成测序文库；

P3.利用测序文库进行测序，得到所捕获核酸片段的基因序列。

12.根据权利要求11所述的基因测序的方法，其特征在于，所述步骤P1中的引物是带生物素标记的引物。