[发明专利]呋喃西林残留标示物氨基脲单克隆抗体及制备方法和应用

权利要求书

1.一种呋喃西林残留标示物氨基脲单克隆抗体，其特征在于：杂交瘤细胞SEM/4G6，CCTCC，CCTCC NO：C201150。

2.权利要求1所述的一种呋喃西林残留标示物氨基脲单克隆抗体的制备方法，其步骤是：

A、将半抗原CPSEM与牛血清白蛋白偶联得到免疫原；

B、将半抗原CPSEM与卵清蛋白偶联得到包被原；

C、利用步骤A的免疫原制备得到保藏号为CCTCC NO：C201150杂交瘤细胞株SEM/4G6所分泌的单克隆抗体；

D、用步骤B的包被原包被固相载体；

E、将待测样品用酸处理，加入苯甲醛超声衍生后，用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯层氮气吹干、正己烷净化和样品稀释液重新溶解得到待测物；

F、对步骤E的待测物进行酶联免疫检测；

步骤E样品稀释液的组分及配比为：NaCl 8.0g，KH₂PO₄ 0.2g，Na₂HPO4·12H₂O2.9g，KCl 0.2g，加双蒸水定容至1000mL。

3.权利要求1所述的一种呋喃西林残留标示物氨基脲单克隆抗体的试剂盒，其特征在于：

(1)包被有包被原CPSEM-OVA的酶标板；

(2)CPSEM标准品溶液6瓶，浓度分别为0、0.25、0.5、1、2、4μg/L；

(3)SEM/4G6细胞株单克隆抗体工作液；

(4)辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG抗体工作液；

(5)浓缩磷酸盐缓冲液：NaCl 80.0g，KH₂PO₄ 2.0g，Na₂HPO₄·12H₂O 29.0g，KCl2.0g，加双蒸水至1000mL；

(6)浓缩洗涤液：NaCl 80.0g，KH₂PO₄ 2.0g，Na₂HPO₄·12H₂O 29.0g，KCl 2.0g，Tween-20 5mL，加双蒸水至1000mL；

(7)底物混合液：准确吸取底物B液10mL，加入100μL底物A液，混匀，现配现用；

(9)终止液：2mol/L硫酸溶液。

4.根据权利要求1所述的一种呋喃西林残留标示物氨基脲单克隆抗体的试剂盒，其特征在于：所述的酶标板的制备方法，其步骤是：

(1)包被：用碳酸盐缓冲液将CPSEM-OVA稀释成0.2μg/mL包被原溶液，吸取100μL包被原溶液于各酶标孔，水平放置于湿盒，4℃孵育12h；

(2)洗板：甩出酶标板内包被原溶液，拍干，吸取250μL洗涤液于各酶标孔，静置30秒后，甩出洗涤液，在吸水纸上拍干；重复洗涤3次；

(3)封闭：吸取250μL封闭液于各酶标孔，水平置于湿盒内，37℃培养箱孵育2h；

(4)洗板：甩出封闭液，吸取250μL洗涤液于各酶标孔，静置30秒后，甩出洗涤液，在吸水纸上拍干；重复洗涤3次；

(5)烘干：在吸水纸上拍干后；将酶标板于37℃培养箱中倒置烘干0.5h；

(6)封装：酶标板烘干后和干燥剂一起装入铝箔袋，用真空封装机封装；

所述的干燥剂为硅胶或无水氯化钙其中的一种。

5.权利要求3所述的一种呋喃西林残留标示物氨基脲单克隆抗体的试剂盒在动物可食性组织中呋喃西林残留检测中的应用。