[发明专利]呋喃西林残留标示物氨基脲单克隆抗体及制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于兽药残留分析和免疫学技术领域，具体涉及一种能检测呋喃西林残留标示物氨基脲(SEM)的单克隆抗体，同时还涉及一种能检测呋喃西林残留标示物氨基脲(SEM)的单克隆抗体的制备方法，还涉及一种能检测呋喃西林残留标示物氨基脲(SEM)的单克隆抗体的用途。 

背景技术

呋喃西林属于硝基呋喃类药物，具有5-硝基呋喃环的基本结构，是一种广谱抗菌药，对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、真菌、原虫等均有效，曾在养殖业中被广泛使用。毒理学试验证明呋喃西林及其代谢物均有显著的致癌、致突变等严重毒性作用。欧盟已于1993年禁止呋喃西林在养殖业中使用，我国发布的193号公告《食品动物禁用的兽药及其他化合物清单》将硝基呋喃类药物列入禁用清单。 

由于呋喃西林价格便宜、药效快，目前仍有很多养殖户违禁使用。我国对硝基呋喃类药物的残留监控形势依然严峻，必须尽快完善筛选检测体系，以保证公众的生命健康安全和促进国内外经济贸易的顺利进行。 

HPLC-MS/MS是目前公认的硝基呋喃类药物药物残留检测的确证手段，对牛奶、蛋类、猪肉、禽肉、及虾肉等样品的检测限可达0.1～0.3μg/kg。虽然该方法的灵敏度和精确度均很高，但需要配备昂贵的仪器和专业技术人员，不适合室外操作及高通量筛选。 

通常用于高通量筛选的免疫学检测方法基于抗原抗体的生物学反应，灵敏度高并且易于操作。该类药物已有的免疫学检测报道均为多克隆抗体，Cooper(2007)及Vass(2008a，b)等作者制备兔多克隆抗体，抗体的IC₅₀值(以SEM计算浓度)分别为0.86μg/L和0.14μg/L，采用直接或间接竞争ELISA方法对鸡肉、猪肉、蛋类等样品中SEM残留进行检测的最低检测限分别为0.21μg/kg、0.11μg/kg和0.13μg/kg。多克隆抗体虽灵敏度高，但兔个体差异性导致其在标准化生产过程中存在缺陷，不能实现长期连续的标准化生产，给检测技术的标准化建立带来困难。 

发明内容

本发明的目的是在于提供了一种呋喃西林残留标示物氨基脲单克隆抗体(能检测呋 喃西林残留标示物氨基脲(SEM)的单克隆抗体)，该抗体能特异性识别SEM，与其他类似物无交叉反应。 

本发明的另一个目的是在于提供了一种呋喃西林残留标示物氨基脲单克隆抗体(能检测呋喃西林残留标示物氨基脲(SEM)的单克隆抗体)的制备方法，本发明制备的单抗可识别氨基脲，方法具有简便、快速、灵敏、准确等优点，可用于开发能检测动物可食性组织中氨基脲残留的酶联免疫试剂盒，该方法是由半抗原SEM衍生物(CPSEM)与牛血清白蛋白偶联制备的免疫原免疫小鼠，经细胞融合与克隆筛选后，获得了能特异性分泌SEM单克隆抗体的细胞株杂交瘤细胞株SEM/4G6，CCTCC NO：C201150。 

本发明的第三个目的是在于提供了一种呋喃西林残留标示物氨基脲单克隆抗体(能识别呋喃西林残留标示物SEM)的试剂盒，该试剂盒能广泛应用于动物可食性组织中呋喃西林的残留检测，准确提供动物可食性组织中SEM的残留量信息。 

本发明的第四个目的是在于提供了提供了一种呋喃西林残留标示物氨基脲单克隆抗体(能识别呋喃西林残留标示物SEM)的试剂盒在动物可食性组织中呋喃西林残留检测中的应用，为动物源性食品中呋喃西林的残留监控提供了可靠的技术手段。 

本发明通过以下技术方案实现： 

为了实现本发明的任务，发明人制备了一种能识别SEM的单克隆抗体，其特征在于，它是由杂交瘤细胞SEM/4G6所分泌的。 

上述杂交瘤细胞SEM/4G6，保藏在位于中国武汉武汉大学内的中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，其保藏号为CCTCC NO：C201150。 

所用的免疫原是由半抗原CPSEM与牛血清白蛋白偶联制备的。 

进一步，本发明提出了一种适用于SEM残留检测的酶联免疫(ELISA)方法，该方法包括免疫原、包被原和抗体的制备以及样品的前处理等步骤，一种能识别呋喃西林残留标示物SEM的单克隆抗体的制备方法，其步骤是： 

A、将半抗原CPSEM与牛血清白蛋白采用活性酯法进行偶联合成免疫原； 

B、将半抗原CPSEM与卵清蛋白采用活性酯法进行偶联合成包被原； 

C、利用步骤A的免疫原制备得到保藏号为CCTCC NO：C201150杂交瘤细胞株SEM/4G6所分泌的单克隆抗体； 

D、用步骤B的包被原包被固相载体(如酶标板)；