[发明专利]吉他霉素残留检测用单克隆抗体及制备方法和应用

权利要求书

1.一种吉他霉素残留检测用单克隆抗体，其特征在于，杂交瘤细胞KA/2A9，CCTCC，NO：C201184。

2.权利要求1所述的一种吉他霉素残留检测用单克隆抗体的制备方法，其步骤是：

A、将半抗原吉他霉素与牛血清白蛋白偶联得到免疫原；

B、将半抗原吉他霉素与卵清蛋白偶联得到包被原kitasamycin-AOAA-OVA；

C、利用步骤A的免疫原制备得到杂交瘤细胞株KA/2A9所分泌的单克隆抗体；

D、用步骤B的包被原包被固相载体；

E、将待测样品用偏磷酸/乙醇下提取、乙酸乙酯反萃取，氮气吹干、样品稀释液重新溶解得到待测物；

F、对步骤E的待测物进行酶联免疫检测；

所述的步骤E样品稀释液的组分及配比为：NaCl 8.00g，KH₂PO4 0.20g，Na₂HPO4·12H₂O2.90g，KCl 0.20g，加双蒸水定容至1000mL。

3.权利要求1所述的一种吉他霉素残留检测的试剂盒，它包括：

(1)包被有包被原kitasamycin-AOAA-OVA的酶标板；

(2)吉他霉素标准品溶液6瓶，浓度分别为0、1.25、2.5、5、10、20μg/L；

(3)KA/2A9单克隆抗体工作液；

(4)辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG抗体工作液；

(5)浓缩磷酸盐缓冲液：NaCl 80.00g，KH2PO4 2.00g，Na2HPO4·12H2O 29.00g，KCl2.00g，加双蒸水至1000mL；

(6)浓缩洗涤液：NaCl 80.00g，KH2PO4 2.00g，Na2HPO4·12H2O 29.00g，KCl 2.00g，Tween 20 5mL，加双蒸水至1000mL；

(7)底物混合液；

(8)终止液：2mol/L硫酸溶液。

4.根据权利要求3所述的一种吉他霉素残留检测的试剂盒，其特征在于：所述的一种酶标板制备的制备方法，其步骤是：

1)包被：用碳酸盐缓冲液将kitasamycin-AOAA-OVA稀释成8μg/mL包被原溶液，吸取100μL包被原溶液于各酶标孔，水平放置于湿盒，4℃孵育12h；

2)洗板：甩出酶标板内包被原溶液，拍干，吸取250μL洗涤液于各酶标孔，静置30s后，甩出洗涤液，在吸水纸上拍干，重复洗涤3次；

3)封闭：准确吸取250μL封闭液于各酶标孔，水平置于湿盒内，37℃培养箱孵育2h；

4)洗板：甩出封闭液，准确吸取250μL洗涤液于各酶标孔，静置30s后，甩出洗涤液，在吸水纸上拍干；重复洗涤3次；

5)烘干：在吸水纸上拍干后，将酶标板于37℃培养箱中倒置烘干0.5h；

6)封装：酶标板烘干后和干燥剂一起装入铝箔袋，用真空封装机封装；所述的干燥剂为硅胶、无水氯化钙。

5.权利要求3所述的一种吉他霉素残留检测的试剂盒在动物源性食品中吉他霉素残留检测中的应用。